【ATCC】人肺成纤维细胞（HPF）培养基的配制

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System ATCC 人肺成纤维细胞 Pulmonary Fibroblasts Fibroblast Basal Medium PCS-201-030

小白求助前辈指路

人肺成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人肺成纤维细胞

（HPF）

肺间质中最丰富的细胞类型是成纤维细胞，类似于普通的成纤维细胞，但具有一些显著的特征，如长的分支过程和缝隙连接。HPF的主要功能是产生肺泡隔细胞外基质的Ⅲ型胶原、弹性蛋白和蛋白聚糖。HPF在肺损伤后的修复和重塑过程中发挥重要作用。成纤维细胞向炎症部位的可控聚集对于损伤后有效的组织修复至关重要。成纤维细胞的不足或过度积累均可导致组织功能异常，例如，成纤维细胞过度增殖促进缺氧诱导的肺动脉高压的发展。HPF分离自人肺组织，其fibronectin的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

完全培养基的配制

1)从冰箱中取出生长试剂盒Fibroblast Growth Kit–Serum-Free (ATCC PCS-201-040)（暂时储存温度为-20℃，长期保存温度为-80℃）。在将生长试剂盒的组分加入基础培养基之前，将其解冻。需要将L-谷氨酰胺组分在37°C的水浴中加热，并摇动以充分混匀。

2)取出一瓶Fibroblast Basal Medium（480 mL，2-8℃储存）。

3)使用70%乙醇喷雾剂对生长试剂盒组分瓶和基础培养基瓶的外部表面进行消毒。

4)层流罩或生物安全柜中无菌操作，使用单独的无菌移液管将每个生长试剂盒组分转移到基础培养基瓶中，并充分混匀，避免气泡产生，2-8℃避光保存（可稳定储存30天）。

5)抗菌剂和酚红不是必需的，但如果需要的话可以添加。建议将可选组分（GA溶液或PSA溶液）的体积加入完全生长培养基中，具体建议如下。

①庆大霉素-两性霉素B溶液（Gentamicin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：庆大霉素：10 µg/mL，两性霉素B：0.25 µg/mL）。

②青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：青霉素：10 Units/mL，链霉素：10 µg/mL，两性霉素B：25 ng/mL）。

③酚红（Phenol Red），0.5 mL（最终浓度：33 µM）。

表1 HPF培养材料