【Cellntec】气道上皮细胞相关培养基
气道上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
表 1 气道上皮细胞相关培养基
细胞复苏
1.将所需量的培养基加入到所需的培养容器中，并在细胞培养箱中平衡至少30 min，以预热培养基并调整到生理pH值。
2.在37°C的水浴中轻轻旋转冻存管，直到刚刚融化。从液氮或-80°C取出的冻存管必须迅速解冻，同时确保解冻的细胞温度不超过4°C（在仍有一些冰晶的情况下从水浴中取出冻存管）。
3.使用移液管将冻存管中的细胞重悬，并将整个内容物（1 mL）转移到已准备平衡好的的细胞培养容器中。冻存培养基中的DMSO含量为10%，在培养基中播种后，必须将其稀释至少于1%（10倍稀释）。
4.每个培养容器播种的体积根据推荐每平方厘米的接种密度进行计算。重要提示：培养基需要在细胞播种后6~24 h更换，以去除冻存培养基中的残留DMSO。
细胞培养
1. 在常规培养过程中，培养基应每2~3天更换一次。吸除旧的培养基，并用相同体积的新培养基替换。
2. 对于常规细胞培养，建议不使用抗生素/抗真菌药物。然而，在细胞分离过程中，建议在第2代传代前使用抗生素/抗真菌药物。
细胞传代
1.当细胞密度达到70~90%时，进行传代。不要让细胞达到100%的密度，因为这会触发分化，并导致后续传代的细胞生长不良。
2.吸去培养容器中培养基。
3.添加100 μL/cm2的PBS（不含钙和镁）洗涤细胞，轻轻旋转培养容器以冲洗细胞，随后吸去PBS。
4.向细胞中加入50 μL/cm2的解离酶。推荐使用Accutase（将其加热至室温）。37°C孵育，直到细胞变圆并开始脱落。在显微镜下检查细胞的脱落情况。轻拍培养容器，以移除任何残留的附着细胞。
5.使用Accutase时，向脱落的细胞中加入2.5倍体积的培养基以终止酶的作用。使用Trypsin / EDTA时，加入相同体积的胰蛋白酶抑制剂。
6.用悬浮液冲洗培养容器底部2至3次，以去除所有细胞并将其分离成单个细胞悬浮液，随后转移到离心管中在离心管中静置3分钟，使细胞完全沉淀。
7.在室温下200 g离心5分钟。吸去上清液，加入 1至2 mL的培养基以重悬细胞，计算活细胞数。
8.刚分离细胞的推荐接种密度为12,000 cells/cm2。传代后推荐的接种密度：1,000 cells/cm2。
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