【Lonza】人肺成纤维细胞（HPF）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System Lonza 人肺成纤维细胞 Pulmonary Fibroblasts Basal Medium Fibroblast Growth Medium CC-3132 CC-3131

小白求助前辈指路

人肺成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人肺成纤维细胞

（HPF）

肺间质中最丰富的细胞类型是成纤维细胞，类似于普通的成纤维细胞，但具有一些显著的特征，如长的分支过程和缝隙连接。HPF的主要功能是产生肺泡隔细胞外基质的Ⅲ型胶原、弹性蛋白和蛋白聚糖。HPF在肺损伤后的修复和重塑过程中发挥重要作用。成纤维细胞向炎症部位的可控聚集对于损伤后有效的组织修复至关重要。成纤维细胞的不足或过度积累均可导致组织功能异常，例如，成纤维细胞过度增殖促进缺氧诱导的肺动脉高压的发展。HPF分离自人肺组织，其fibronectin的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入5 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中（按2500 cells/cm²的密度），并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度60%~80%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用5 ml HEPES清洗细胞后吸除，加入2 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞（2-6 min），用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入4 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并快速转移到15 mL离心管中。用2 ml HEPES收集残余的细胞并转移至离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入2-3 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞并对活细胞计数。按2500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。（传代至单层细胞需6-9天）

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPF培养材料

参考文献

[1] Kuwano K, Hagimoto N, Hara N. (2001) “Molecular mechanisms of pulmonary fibrosis and current treatment.” Curr Mol Med 1(5): 551-73.

[2] Das M, Dempsey EC, Reeves JT, Stenmark KR. (2002) “Selective expansion of fibroblast subpopulations from pulmonary artery adventitia in response to hypoxia.” Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 282(5): L976-86.

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