【Lonza】人肺动脉内皮细胞（HPAEC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System Lonza 人肺动脉内皮细胞 Pulmonary Artery Endothelial Cells endothelial cell Basal medium CC-3162 CC-3156

小白求助前辈指路

人肺动脉内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人肺动脉内皮细胞

（HPAEC）

对HPAEC（来自正常人）和D-HPAEC（来自于Ι或Ⅱ型糖尿病患者）进行特异性抗体免疫荧光染色，细胞对乙酰化低密度脂蛋白（acetylated LDL）和von Willebrand因子（vWF）抗原呈阳性染色，而对平滑肌α-肌动蛋白呈阴性染色。

肺动脉携带脱氧的血液从心脏输送到肺脏。与其他血管内皮细胞类似，肺动脉内皮细胞（PAEC）通过产生凝血和纤溶的激活剂和抑制剂来调节凝血和纤溶过程。此外，肺动脉内皮细胞（PAEC）产生的介质会影响血小板的粘附和聚集。PAEC通过合成和处理血管活性分子来控制血管张力，并与间充质细胞相互作用，来调节炎症事件。PAEC的这些功能与急性肺损伤、肺动脉高压、水肿、栓塞、肺动脉瘤和慢性阻塞性肺疾病有关。HPAEC的vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM)特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养基： HPAEC用Clonetics™ EGM™-2 BulletKit™提供的完全培养基（包含基础培养基及FBS在内的补充物）培养。

操作步骤

将解冻后的HPAEC细胞按1:10的比例加入预热的基础培养基中，轻柔混匀，室温300 rpm离心10 min。去除上清，用EGM™-2完全培养基对细胞沉淀轻柔重悬后，加入到适当的培养瓶皿中并置于细胞培养箱中进行培养。

换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。之后每三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度达到70%-90%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HEPES清洗细胞后吸除加入适量T/E进行消化，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2倍T/E等体积的TNS进行终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，室温300 rpm离心10 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据2,500-5,000 cells/cm²的密度传代。（从传代长至单层细胞需要5-9天）

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPAEC培养材料

参考文献

[1] Townsley MI. (2012) “Structure and composition of pulmonary arteries, capillaries, and veins.” Compr Physiol. 2: 675-709.

[2] Studdy PR, Lapworth R, Bird R. (1983) “Angiotensin-converting enzyme and its clinical significance-a review.” J Clin Pathol. 36: 938-47.

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[4] Song Y, Coleman L, Shi J, Beppu H, Sato K, Walsh K, Loscalzo J, Zhang YY. (2008) “Inflammation, endothelial injury, and persistent pulmonary hypertension in heterozygous BMPR2-mutant mice.” Am J Physiol Heart Circ Physiol. 295: H677-90.

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