【ScienCell】人牙龈成纤维细胞（HGnF）产品使用攻略
人牙龈成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人牙龈成纤维细胞
（HGnF）
成纤维细胞是间充质细胞，负责连接组织中大部分的细胞外基质合成，并在伤口愈合过程中发挥重要作用。牙龈成纤维细胞是牙龈组织的主要成分，在牙龈组织的维持中起着关键作用。HGnF表达多种细胞表面分子，包括CD9、CD26、CD55、CD59、CD63、CD71、CD86、CD95、CD99和CD117，还表达蛋白酶激活受体-1（PAR-1）和蛋白酶激活受体-3（PAR-3）的mRNA。
HGnF分离自人牙龈组织，其fibronectin的特异性免疫荧光染色呈阳性
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。
培养基：HGnF用提供的FM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1%FGS和1% P/S）培养。
操作方法
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL FM完全培养基（基础培养基、FBS、FGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HGnF加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到95%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HGnF培养材料
参考文献
[1] Di Domenico G, Del Vecchio L, Postiglione L, Ramaglia L. (2003) “Immunophenotypic analysis of human gingival fibroblasts and its regulation by Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor (GM-CSF).” Minerva Stomatol. 52(3):81-7, 87-91.
[2] Tanaka N, Morita T, Nezu A, Tanimura A, Mizoguchi I, Tojyo Y. (2003) “Thrombin-induced Ca2+ mobilization in human gingival fibroblasts is mediated by protease-activated receptor-1 (PAR-1).” Life Sci. 73(3):301-10
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