【Lonza】人乳腺上皮细胞（HMEC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 女性生殖细胞系统 Female Reproductive Cell System Lonza 人乳腺上皮细胞 Mammary Epithelial Cells Basal Medium Mammary Epithelial Cell Growth Medium

小白求助前辈指路

人乳腺上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人乳腺上皮细胞

（HMEC）

分离自人的乳腺组织，cytokeratins14和cytokeratins18的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性，而cytokeratin 19呈阴性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入5 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中（按2500 cells/cm²的密度），并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度60%~80%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用5 ml HEPES清洗细胞后吸除，加入2 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞（2-6 min），用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入4 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并快速转移到15 mL离心管中。用2 ml HEPES收集残余的细胞并转移至离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入2-3 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞并对活细胞计数。按2500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HMEC培养材料