【ATCC】人支气管平滑肌细胞（HBSMC）培养基的配制

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System ATCC 人支气管平滑肌细胞 Bronchial Smooth Muscle Cells Vascular Cell Basal Medium PCS-100-030

小白求助前辈指路

人支气管平滑肌细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人支气管平滑肌细胞

（HBSMC）

气道平滑肌是维持气道张力的基础，其超微结构特征和调节机制对正常的气道功能至关重要。严重哮喘等呼吸系统疾病患者表现出支气管平滑肌重量增加的显著特点。平滑肌重量的增加与异常的支气管平滑肌细胞（BSMC）增殖或收缩蛋白的积累相关。平滑肌细胞增殖是哮喘气道重塑的重要组成部分，因此是开发新型抗哮喘药物的靶点。气道平滑肌细胞表达CT-1，并在体外释放颗粒细胞-吞噬细胞集落刺激因子、RANTES和IL-8。HBSMC有助于阐明BSMC增殖的细胞和分子机制进而开发治疗哮喘的药物。HBSMC分离自人支气管和细支气管，其α-smooth muscle actin（α-SMA）特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

完全培养基的配制

1)从冰箱中取出生长试剂盒（暂时储存温度为-20℃，长期保存温度为-80℃），确保所有组分的盖子都是紧闭的。

2)在将生长试剂盒的组分加入基础培养基之前，将其解冻。需要将L-谷氨酰胺组分在37°C的水浴中加热，并摇动以充分混匀，随后再加入至基础培养基中。

3)取出一瓶Vascular Cell Basal Medium （475 mL，2-8℃储存）。

4)使用70%乙醇喷雾剂对生长试剂盒组分瓶和基础培养基瓶的外部表面进行消毒。

5)层流罩或生物安全柜中无菌操作，使用单独的无菌移液管将每个生长试剂盒组分转移到基础培养基瓶中，并充分混匀，避免气泡产生，2-8℃避光保存（可稳定储存30天）。

6)抗菌剂和酚红不是必需的，但如果需要的话可以添加。建议将可选组分（GA溶液或PSA溶液）的体积加入完全生长培养基中，具体建议如下。

①庆大霉素-两性霉素B溶液（Gentamicin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：庆大霉素：10 µg/mL，两性霉素B：0.25 µg/mL）。

②青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：青霉素：10 Units/mL，链霉素：10 µg/mL，两性霉素B：25 ng/mL）。酚红（Phenol Red），0.5 mL（最终浓度：33 µM）。

表1 HBSMC培养材料