【ScienCell】人支气管上皮细胞（HBEpiC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System Sciencell 人支气管上皮细胞 Bronchial Epithelial Cells Bronchial Epithelial Cell Medium 3211

小白求助前辈指路

人支气管上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人支气管上皮细胞

（HBEpiC）

呼吸道上皮由从近端到远端由纤毛、非纤毛和粘液分泌细胞组成的混合细胞群组成。这些细胞的个体特征不仅创造了对抗各种有毒物质的有效物理屏障，而且通过产生和释放大量的化学介质和细胞因子，创造了高度复杂的宿主防御系统。支气管上皮由表面上皮细胞和黏液腺组成。表面上皮细胞由三种主要细胞类型组成：基底细胞、杯状细胞和纤毛细胞，其中后两者形成基底上柱状结构，是黏液纤毛清除所必需的。呼吸上皮细胞负责润滑肺部、保持湿度和清洁呼吸道。它们是药物、毒素和致癌物的重要靶点。此外，它们还与许多疾病如囊性纤维化有关。使用支气管上皮细胞（BepiC）的研究表明，IL-4和IL-13刺激可以改变细胞增殖、纤毛跳动和黏液产生。BepiC的增殖也部分受EGF受体信号的调控。培养的HBEpiC是研究支气管上皮功能和病理生理的体外模型。HBEpiC分离自人支气管，其cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HBEpiC用提供的BepiCM完全培养基（包含基础培养基、1% BEpiCGS和1% P/S）培养。

操作步骤

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL BepiCM完全培养基（基础培养基、BEpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HBEpiC

3) 加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90 %时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至50 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HBEpiC培养材料

参考文献

[1] Velden VH, Versnel HF. (1998) “Bronchial epithelium: morphology, function and pathophysiology in asthma.” Eur. Cytokine Netw. 9: 585–597.

[2] Kikuchi T, Shively JD, Foley JS, Drazen JM, Tschumperlin DJ. (2004) “Differentiation-dependent responsiveness of bronchial epithelial cells to IL-4/13 stimulation.” Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 287: L119-26.

[3] Kim S, Schein AJ, Nadel JA. (2005) “E-cadherin promotes EGFR-mediated cell differentiation and MUC5AC mucin expression in cultured human airway epithelial cells.” Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 289: L1049-60.

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