【PromoCell】人支气管上皮细胞（HBEpiC）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人支气管上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人支气管上皮细胞

（HBEpiC）

Human Bronchial Epithelial Cells（# C-12640）分离自人支气管表面上皮。

培养方式

培养基：用提供的Airway Epithelial Cell Growth Medium（Serum-free）（完全培养基包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将补充剂室温融化后加入至Basal Medium混匀，避光保存于4℃条件下（完全培养基4℃-8℃条件下可储存6周）。

2) T-25中加入10 mL Airway Epithelial Cell Growth Medium完全培养基。细胞播种前，在37°C和5% CO2培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。

1) 将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按10,000~15,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HBEpiC培养材料

参考文献

[1] Velden VH, Versnel HF. (1998) “Bronchial epithelium: morphology, function and pathophysiology in asthma.” Eur. Cytokine Netw. 9: 585–597.

[2] Kikuchi T, Shively JD, Foley JS, Drazen JM, Tschumperlin DJ. (2004) “Differentiation-dependent responsiveness of bronchial epithelial cells to IL-4/13 stimulation.” Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 287: L119-26.

[3] Kim S, Schein AJ, Nadel JA. (2005) “E-cadherin promotes EGFR-mediated cell differentiation and MUC5AC mucin expression in cultured human airway epithelial cells.” Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 289: L1049-60.

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