【Lonza】人支气管平滑肌细胞（HBSMC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System Lonza 人支气管平滑肌细胞 Bronchial Smooth Muscle Cells Smooth Muscle Cell Growth Medium

小白求助前辈指路

人支气管平滑肌细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人支气管平滑肌细胞

（HBSMC）

气道平滑肌是维持气道张力的基础，其超微结构特征和调节机制对正常的气道功能至关重要。严重哮喘等呼吸系统疾病患者表现出支气管平滑肌重量增加的显著特点。平滑肌重量的增加与异常的支气管平滑肌细胞（BSMC）增殖或收缩蛋白的积累相关。平滑肌细胞增殖是哮喘气道重塑的重要组成部分，因此是开发新型抗哮喘药物的靶点。气道平滑肌细胞表达CT-1，并在体外释放颗粒细胞-吞噬细胞集落刺激因子、RANTES和IL-8。HBSMC有助于阐明BSMC增殖的细胞和分子机制进而开发治疗哮喘的药物。HBSMC分离自人支气管和细支气管，其α-smooth muscle actin（α-SMA）特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和5% FBS及其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入10 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HEPES清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按3500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。（传代至单层细胞需6-10天）

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HBSMC培养材料

参考文献

[1] Zhou D, Zheng X, Wang L, Stelmack G, Halayko AJ, Dorscheid D, Bai TR. (2003) “Expression and effects of cardiotrophin-1 (CT-1) in human airway smooth muscle cells.” Br J Pharmacol 140: 1237-1244.

[2] Oltmanns U, Issa R, Sukkar MB, John M, Chung KF. (2003) “Role of c-jun N-terminal kinase in the induced release of GM-CSF, RANTES and IL-8 from human airway smooth muscle cells.” Br J Pharmacol 139: 1228-1234.

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