【ScienCell】人小气道上皮细胞（HPSAEpiC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System Sciencell 人小气道上皮细胞 Small Airway Epithelial Cells Small Airway Epithelial Cell Medium 3231

小白求助前辈指路

人小气道上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人小气道上皮细胞

（HPSAEpiC）

气道上皮细胞在气道中形成连续的衬里，作为对外界有害因素的保护性物理和功能屏障，发挥着独特的作用。小气道上皮细胞（SAEpiC)通过趋化因子的产生和黏附分子的表达参与宿主防御，从而调节免疫反应，并产生有助于肺液体平衡的液体。许多气道疾病，如哮喘、毛细支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、囊性纤维化等，都涉及气道表面上皮的损伤。HPSAEpiC的培养研究可有助于确定预防气道疾病的新的治疗方案。HPSAEpiC分离自人肺组织，其cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HPSAEpiC用提供的SAEpiCM完全培养基（包含基础培养基、1% SAEpiCGS和1% P/S）培养。

操作步骤

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL SAEpiCM完全培养基（基础培养基、SAEpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HPSAEpiC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90 %时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至50 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPSAEpiC培养材料

参考文献

[1] Stellato C, Beck LA, Gorgone GA, Proud D, Schall TJ, Ono SJ, Lichtenstein LM, Schleimer RP. (1995)“Expression of the chemokine RANTES by a human bronchial epithelial cell line. Modulation by cytokines and glucocorticoids.” J Immunol. 155: 410–418.

[2] Atsuta J, Sterbinsky SA, Plitt J, Schwiebert LM, Bochner BS, Schleimer RP. (1997) “Phenotyping and cytokine regulation of the BEAS-2B human bronchial epithelial cell: demonstration of inducible expression of the adhesion molecules VCAM-1 and ICAM-1.” Am J Respir Cell Mol Biol. 17: 571–582.

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