【ATCC】人体膀胱平滑肌细胞（HBdSMC）培养基的配制

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人原代细胞 Human Primary cells 尿道细胞系统 Urinary tract cell system ATCC 人体膀胱平滑肌细胞 Bladder Smooth Muscle Cells Vascular Cell Basal Medium PCS-100-030

小白求助前辈指路

人体膀胱平滑肌细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人体膀胱平滑肌细胞

（HBdSMC）

膀胱是由平滑肌细胞（smooth muscle cells，SMC）组成的中空器官。膀胱平滑肌的松弛和收缩分别允许膀胱储存和排空尿液。膀胱SMC的表型调节和诱导型一氧化氮合酶的表达与各种病理状态相关，包括膀胱功能障碍。研究表明，缺氧抑制人膀胱SMC增殖，膀胱SMC分化依赖于尿路上皮细胞释放的因子。膀胱SMC细胞外基质的分泌表型可通过所经历的机械变形的频率来改变。SMC增殖是多种疾病发生和发展的主要促进因素。因此，了解SMC在疾病发生和维持过程中的变化对治疗方法的开发至关重要。HBdSMC的α-smooth muscle actin（α-SMA）特异性免疫荧光染色呈阳性。

完全培养基的配制

1)从冰箱中取出生长试剂盒（暂时储存温度为-20℃，长期保存温度为-80℃），确保所有组分的盖子都是紧闭的。

2)在将生长试剂盒的组分加入基础培养基之前，将其解冻。需要将L-谷氨酰胺组分在37°C的水浴中加热，并摇动以充分混匀，再加入至基础培养基中。

3)取出一瓶Vascular Cell Basal Medium（475 mL，2-8℃储存）。

4)使用70%乙醇喷雾剂对生长试剂盒组分瓶和基础培养基瓶的外部表面进行消毒。

5)层流罩或生物安全柜中无菌操作，使用单独的无菌移液管将每个生长试剂盒组分转移到基础培养基瓶中，并充分混匀，避免气泡产生，2-8℃避光保存（可稳定储存30天）。

6)抗菌剂和酚红不是必需的，但如果需要的话可以添加。建议将可选组分（GA溶液或PSA溶液）的体积加入完全生长培养基中，具体建议如下。

①庆大霉素-两性霉素B溶液（Gentamicin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：庆大霉素：10 µg/mL，两性霉素B：0.25 µg/mL）。

②青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：青霉素：10 Units/mL，链霉素：10 µg/mL，两性霉素B：25 ng/mL）。酚红（Phenol Red），0.5 mL（最终浓度：33 µM）。

表 1 HBdSMC培养材料