【ScienCell】人体膀胱平滑肌细胞(HBdSMC)产品使用攻略

【ScienCell】人体膀胱平滑肌细胞(HBdSMC)产品使用攻略

小白求助 前辈指路


人体膀胱平滑肌细胞培养不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!


人体膀胱平滑肌细胞

(HBdSMC)

膀胱是由平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMC)组成的中空器官。膀胱平滑肌的松弛和收缩分别允许膀胱储存和排空尿液。膀胱SMC的表型调节和诱导型一氧化氮合酶的表达与各种病理状态相关,包括膀胱功能障碍。研究表明,缺氧抑制人膀胱SMC增殖,膀胱SMC分化依赖于尿路上皮细胞释放的因子。膀胱SMC细胞外基质的分泌表型可通过所经历的机械变形的频率来改变。SMC增殖是多种疾病发生和发展的主要促进因素。因此,了解SMC在疾病发生和维持过程中的变化对治疗方法的开发至关重要。HBdSMC的α-smooth muscle actin(α-SMA)特异性免疫荧光染色呈阳性。


 培养方式


培养瓶:PLL(多聚-L-赖氨酸)包被的培养瓶。

培养基:HBdSMC在提供的SMCM完全培养基(包含基础培养基、2% FBS、1% SMCGS和1% P/S)中培养。

操作步骤:

1) 包被PLL(2 μg/cm2)培养瓶(T-75培养瓶)的准备:将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中,加入15 μL PLL原液,轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜(或至少1小时)。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次,加入20 mL SMCM完全培养基(基础培养基、FBS、SMCGS和P/S按比例混合配制),将解冻后的HBdSMC加入至包被的T-75中,十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀,将培养瓶放入细胞培养箱中。(注:不建议在解冻后稀释和离心细胞,因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜(DMSO)的影响更大。同时,将细胞放置在PLL涂层的培养瓶中有助于促进细胞附着。)

换液:为了获得最佳结果,在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基,以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞,之后每隔三天更换一次培养基,直到培养达到约70%的密度,一旦培养达到约70%的密度,每隔一天更换一次培养基,直到培养达到约90%的密度。

传代:当细胞密度达到90%-95%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡(不建议37℃加热)。

2) 弃除旧培养基,并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱(注:原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶),一段时间后镜下观察,待细胞完全变圆、脱落,轻轻拍打底部和侧面,加入2 mL FBS(#0500)终止消化,将细胞悬液转移至15 mL离心管中,1000 rpm离心5 min,用新培养基重悬细胞沉淀后计数,根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件:在CO2浓度为5%,温度为37℃,相对湿度(RH)为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HBdSMC培养材料

参考文献

[1] Johansson R, Persson K. (2004) “Phenotypic modulation of cultured bladder smooth muscle cells and the expression of inducible nitric oxide synthase.” Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 286(4):R642-8.

[2] Galvin DJ, Watson RW, O'Neill A, Coffey RN, Taylor C, Gillespie JI, Fitzpatrick JM. (2004) “Hypoxia inhibits human bladder smooth muscle cell proliferation: a potential mechanism of bladder dysfunction.” Neurourol Urodyn 23(4):342-8.

[3] Liu W, Li Y, Hayward S, Cunha G, Baskin L. (2000) “Diffusable growth factors induce bladder smooth muscle differentiation.” In Vitro Cell Dev Biol Anim. 36(7):476-84.

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