【ScienCell】人体膀胱平滑肌细胞(HBdSMC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 尿道细胞系统 Urinary tract cell system Sciencell 人体膀胱平滑肌细胞 Bladder Smooth Muscle Cells Skeletal Muscle Cell Growth Medium 1101

小白求助前辈指路

人体膀胱平滑肌细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人体膀胱平滑肌细胞

(HBdSMC）

膀胱是由平滑肌细胞（smooth muscle cells，SMC）组成的中空器官。膀胱平滑肌的松弛和收缩分别允许膀胱储存和排空尿液。膀胱SMC的表型调节和诱导型一氧化氮合酶的表达与各种病理状态相关，包括膀胱功能障碍。研究表明，缺氧抑制人膀胱SMC增殖，膀胱SMC分化依赖于尿路上皮细胞释放的因子。膀胱SMC细胞外基质的分泌表型可通过所经历的机械变形的频率来改变。SMC增殖是多种疾病发生和发展的主要促进因素。因此，了解SMC在疾病发生和维持过程中的变化对治疗方法的开发至关重要。HBdSMC的α-smooth muscle actin（α-SMA）特异性免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HBdSMC在提供的SMCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% SMCGS和1% P/S）中培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL SMCM完全培养基（基础培养基、FBS、SMCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HBdSMC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞放置在PLL涂层的培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HBdSMC培养材料

参考文献

[1] Johansson R, Persson K. (2004) “Phenotypic modulation of cultured bladder smooth muscle cells and the expression of inducible nitric oxide synthase.” Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 286(4):R642-8.

[2] Galvin DJ, Watson RW, O'Neill A, Coffey RN, Taylor C, Gillespie JI, Fitzpatrick JM. (2004) “Hypoxia inhibits human bladder smooth muscle cell proliferation: a potential mechanism of bladder dysfunction.” Neurourol Urodyn 23(4):342-8.

[3] Liu W, Li Y, Hayward S, Cunha G, Baskin L. (2000) “Diffusable growth factors induce bladder smooth muscle differentiation.” In Vitro Cell Dev Biol Anim. 36(7):476-84.

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