【Cellntec】人尿道上皮细胞的分离（Human Urothelial Cells Isolation）
人尿道上皮细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人尿道上皮细胞的分离
（Human Urothelial Cells Isolation）
本操作描述了使用CnT-Prime（CnT-PR）培养基从膀胱活检中分离原代人尿道上皮细胞的方法。本方法建议在dispase分离后直接接种小的细胞团块/器官样结构。
操作步骤
1.将培养基、PBS、Accutase以及所用到的酶等提前置于室温平衡。
2.将膀胱组织样本直接放入CnT-PR培养基中。组织样本可以在4°C下存储，直到准备进行第2步。
3.将组织放入培养皿中。使用无菌手术刀将其切成1×1 cm的小块。将组织块放入15 mL离心管中（提前加入10-12 mL用CnT-PR培养基稀释为1×的dispase溶液以及2×G/A）。4°C过夜孵育（约15 h）。将离心管水平放置，确保组织与dispase充分接触。
4.将组织样本连同dispase溶液倒入培养皿中。将每个组织样本转移到含有CnT-PR的新培养皿中，以洗去多余的dispase。
5.为了去除上皮层，用弯镊刮擦组织块的所有表面。分离的上皮细胞将呈现为白色的团块，剩余的基质将呈现为红色。
6.用巴氏管将上皮细胞团块转移到15 mL的离心管中。避免将超过1 mL的培养基与细胞一起转移。可以通过多次上下移液来打散较大的团块或组织块。
7.不建议进一步对这些细胞团块进行酶解，因为后续的细胞附着和生长很容易受到影响。将团块直接接种到表面积大约是原始组织样本的5-10倍的培养瓶中。
8.用添加IsoBoost的CnT-PR培养基培养细胞至少3天，随后后切换到常规的CnT-PR培养基。2天后更换培养基，之后每3天更换一次（如果由于密度过高而导致培养在第二天就达到饱和状态，则在早上更换培养基，并在下午进行细胞传代，推荐使用Accutase进行传代。）。
表 1 Human Urothelial Cells 分离材料
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