【Lonza】人膀胱微血管内皮细胞(HBdMEC）产品使用攻略
人膀胱微血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人膀胱微血管内皮细胞
(HBdMEC）
膀胱为空心球，膀胱壁由浆膜、肌层、黏膜下层、黏膜肌层和固有层组成。膀胱中循环系统微血管的内皮细胞具有招募循环免疫细胞进入组织的能力，进而在炎症过程中发挥着关键的“看门人”作用。在凝血酶或类胰蛋白酶刺激下，膀胱壁中的内皮细胞会导致磷脂代谢物的产生，并可促进间质性膀胱炎中的炎症过程。HBdMEC为研究内皮细胞在生理和炎症条件下的作用提供体外模型。HBdMEC可通过VWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)特异性荧光免疫染色鉴定。
培养方式
人类膀胱微血管内皮细胞是从膀胱周围正常组织的微血管中分离得到的细胞。表达CD31/105、von Williebrand因子VIII，并对摄取乙酰化低密度脂蛋白。
培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和5% FBS及其他补充剂）培养。
操作步骤：
1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。
2) T-25中加入10 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养。
换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。
传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。
1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2)弃除旧培养基，并用HEPES清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按3500 cells/cm2接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm2的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HMVEC-Bd培养材料
参考文献
[1] Hossler FE, Monson FC. (1995) “Microvasculature of the rat urinary bladder”. Anat Rec. 243: 438–448.
[2] Rickard A, Portell C, Kell P, Vinson S, McHowat J. (2005 ) “Protease-activated receptor stimulation activates a Ca 2+-independent phospholipase A2 in bladder microvascular endothelial cells.” Am J Physiol Renal Physiol 288:F714-F721.
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