【ScienCell】人视网膜色素上皮细胞(HRPEpiC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 眼睛细胞系统 Ocular Cell System Sciencell 人视网膜色素上皮细胞 Retinal Pigment Epithelial Cells Epithelial Cell Medium

小白求助前辈指路

人视网膜色素上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人视网膜色素上皮细胞

(HRPEpiC）

视网膜是覆盖在眼球后部的多层结构，由感光细胞和视网膜色素上皮细胞（RPEpiC）组成。RPEpiC位于神经感觉视网膜和脉络膜之间，形成外部血-视网膜屏障，控制视网膜下间隙的化学成分。与其他上皮组织不同，其他上皮组织通常面对没有基质的顶端腔隙，而RPEpiC的顶端质膜直接与细胞外基质接触。RPEpiC具有特定的极性蛋白分布。RPEpiC在调节相邻感光细胞膜的更新、视黄醇代谢和通过细胞内黑色素保护视网膜免受光损伤方面发挥关键作用，HRPEpiC可作为增殖性视网膜病变和老年性黄斑变性等各种眼部疾病的发病机制的研究工具。HRPEpiC可通过cytokeratin-18和cytokeratin-19特异性抗体免疫荧光染色鉴定。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸（2 μg/cm²）包被培养瓶。

培养基：HRPEpiC在提供的EpiCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% EpiCGS和1% P/S）中培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL EpiCM完全培养基（基础培养基、FBS、EpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HRPEpiC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至50 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HRPEpiC培养材料