【Cellntec】人角膜上皮细胞的分离（Human Cornea Epithelium Isolation）
人角膜上皮细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人角膜上皮细胞的分离
（Human Cornea Epithelium Isolation）
本操作描述了使用CnT-Prime（CnT-PR）培养基从人眼部组织分离原代人角膜上皮细胞的方法。
操作步骤
1.将培养基、PBS、Accutase以及所用到的酶等提前置于室温平衡。
2.小心地从眼睛中解剖角膜组织，确保包括边缘区域。将组织样本在存储在，直到开始分离前一天的傍晚。
3.将组织样本放入15 mL的离心管中（提前加入10 mL 1倍dispase溶液以及2倍G/A）。4°C下孵育组织样本过夜（约15 h）。
4.第二天将组织样本连同dispase溶液转移到培养皿中。将每个组织样本转移到含有CnT-PR培养基的新培养皿中，以洗去多余的dispase。
5.在将组织样本浸入CnT-PR培养基的同时，用两对弯镊轻轻分离基质（粉红色、不透明、黏稠）和表皮（白色、半透明）。如果不易分离，将组织样本放回含有dispase溶液的培养皿中，在室温下再处理60 min。
6.将上皮组织片转移到2 mL的Accutase中，37°C孵育10-15 min以分离上皮细胞（用盖子盖住培养皿以防止蒸发）。
7.用移液器轻轻上下移液以打散上皮层。如果消化不完全，再用Accutase处理5 min。
8.将单细胞溶液转移到15 mL的离心管中，加入5 mL的CnT-PR培养基稀释Accutase。
9.180 × g室温离心5 min。吸去上清液，加入2 mL CnT-PR培养基重悬细胞沉淀。计数细胞，并以每平方厘米4×104 cells/cm2的初始密度接种活细胞。
10.接种后，用添加IsoBoost的CnT-PR培养基培养细胞至少3天，随后切换到标准的CnT-PR培养基中培养。
表 1 Human Cornea Epithelium 分离材料
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