【ATCC】人角膜上皮细胞（HCEpiC）培养基的配制

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ATCC 人原代细胞 Human Primary cells 眼睛细胞系统 Ocular Cell System 人角膜上皮细胞 Corneal Epithelial Cells Corneal Epithelial Cell Basal Medium PCS-700-030

小白求助前辈指路

人角膜上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人角膜上皮细胞

（HCEpiC）

角膜是一种独特的组织，因其透明性和无血管性而与众不同。角膜由三个明显的细胞层组成：外层上皮、中央基质和内层内皮。角膜上皮通过感知病原体的存在并提供信号来激活角膜防御系统，在先天免疫反应中发挥作用。角膜上皮细胞表达高水平的醛脱氢酶，以保护其免受紫外线和4-羟基壬醛引起的细胞损伤，同时角膜上皮的更新由一系列细胞因子调节，包括表皮生长因子，这些因子在上皮的深层激活其对应的受体。培养的角膜上皮细胞可作为研究毒理学的有效工具。HCEpiC在无血清培养条件下具有鹅卵石状形态，可通过细胞角蛋白-18（cytokeratin-18）和细胞角蛋白-19（cytokeratin-19）特异抗体的免疫荧光染色进行鉴定。

完全培养基的配制

1)从冰箱中取出生长试剂盒（暂时储存温度为-20℃，长期保存温度为-80℃），确保所有组分的盖子都是紧闭的。

2)在将生长试剂盒的组分加入基础培养基之前，将其解冻。需要将L-谷氨酰胺组分在37°C的水浴中加热，并摇动以充分混匀，再加入至基础培养基中。

3)取出一瓶Corneal Epithelial Cell Basal Medium（485 mL，2-8℃储存）。

4)使用70%乙醇喷雾剂对生长试剂盒组分瓶和基础培养基瓶的外部表面进行消毒。

5)层流罩或生物安全柜中无菌操作，使用单独的无菌移液管将每个生长试剂盒组分转移到基础培养基瓶中，并充分混匀，避免气泡产生，2-8℃避光保存（可稳定储存30天）。

6)抗菌剂和酚红不是必需的，但如果需要的话可以添加。建议将可选组分（GA溶液或PSA溶液）的体积加入完全生长培养基中，具体建议如下。

①庆大霉素-两性霉素B溶液（Gentamicin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：庆大霉素：10 µg/mL，两性霉素B：0.25 µg/mL）。

②青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：青霉素：10 Units/mL，链霉素：10 µg/mL，两性霉素B：25 ng/mL）。

③酚红（Phenol Red），0.5 mL（最终浓度：33 µM）。

表1 HCEpiC培养材料