【ATCC】人脂肪来源的间充质干细胞（HMSC）培养基的配制
人脂肪来源的间充质干细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人脂肪来源的间充质干细胞
（HMSC）
间充质干细胞（MSC）是一类成体干细胞，具有发展成脂肪、软骨、骨骼、肌腱和肌肉的成熟细胞的潜力。由于MSC在再生医学中有潜力用于替代受损组织而引起关注。在转化生长因子存在下，无血清培养的MSC将分化为软骨细胞。相反，在含有抗坏血酸和地塞米松的血清培养基中，MSC将分化为成骨细胞。MSC具有自我更新和分化成各种间充质组织的能力。凭借其自我更新的能力，MSC有潜力移植到受伤部位或种植在生物仿生支架上，以生成适当的组织构建物。
HMSC分离自人的脂肪组织，其CD73和CD90特异性抗体免疫荧光染色呈阳性，分化后的成熟脂肪细胞可进行油红O染色，分化后的骨细胞可进行茜素红染色。
培养方式
人类脂肪来源的间充质干细胞（Normal Human Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells）是一种类似成纤维细胞的细胞，当它们在含有Mesenchymal Stem Cell Growth Kit低血清成分的间充质干细胞基础培养基中培养时，在低血清（2% FBS）条件下提供了一个理想的细胞系统来扩增间充质干细胞。在最佳生长条件下维持时，人类脂肪来源的间充质干细胞具有多能性，能够分化为脂肪、骨骼和软骨细胞系。
完全培养基的配制
1)从冰箱中取出生长试剂盒Mesenchymal Stem Cell Growth Kit-Low Serum (ATCC PCS-500-040)暂时储存温度为-20℃，长期保存温度为-80℃），确保所有组分的盖子都是紧闭的。在将生长试剂盒的组分加入基础培养基之前，将其解冻。需要将L-谷氨酰胺组分在37°C的水浴中加热，并摇动以充分混匀。
2)取出一瓶Mesenchymal Stem Cell Basal Medium（485 mL，2-8℃储存）。
3)使用70%乙醇喷雾剂对生长试剂盒组分瓶和基础培养基瓶的外部表面进行消毒。
4)层流罩或生物安全柜中无菌操作，使用单独的无菌移液管将每个生长试剂盒组分转移到基础培养基瓶中，并充分混匀，避免气泡产生，2-8℃避光保存（可稳定储存30天）。
5)抗菌剂和酚红不是必需的，但如果需要的话可以添加。建议将可选组分（GA溶液或PSA溶液）的体积加入完全生长培养基中，具体建议如下。
①庆大霉素-两性霉素B溶液（Gentamicin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：庆大霉素：10 µg/mL，两性霉素B：0.25 µg/mL）。
②青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：青霉素：10 Units/mL，链霉素：10 µg/mL，两性霉素B：25 ng/mL）。
③酚红（Phenol Red），0.5 mL（最终浓度：33 µM）。
表1 Human Adipose-Derived
Mesenchymal Stem Cells 培养材料
其他细胞品类
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