【Lonza】HPA分化为Mature adipocytes及维持方法
人前体脂肪细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人前体脂肪细胞
（HPA）
脂肪细胞在能量储存和代谢中起着重要作用。脂肪细胞分化是一个对代谢稳态和营养信号传导至关重要的发育过程，受到基因表达和信号转导等复杂作用的调控。脂肪组织中的前脂肪细胞在成年期始终存在，并且可增殖和分化为成熟的脂肪细胞，从而增加脂肪组织的质量。体外研究表明，不同组织来源的前脂肪细胞在脂质积累、脂肪生成转录因子表达和TNFα诱导的凋亡方面存在差异。脂肪细胞分化与众多生理和病理过程密切相关，包括脂肪代谢、肥胖、糖尿病、高脂血症和乳腺癌。HPA分离自内脏脂肪或皮下脂肪组织，其CD44和CD90免疫荧光染色呈阳性，且分化后脂质染色呈阳性。
培养方式
Preadipocyte Medium (PAM, Cat. #7211)用于体外培养HPA-v。Preadipocyte Differentiation Medium (PADM, Cat. #7221)用于将前体脂肪细胞体外分化为成熟的脂肪细胞，随后使用Adipocyte Medium (AdM, Cat. #7201)来维持分化后的成熟脂肪细胞。
HPA的分化及维持
Preadipocyte Differentiation Medium的制备：将Insulin, Dexamethasone, Indomethacin, 3- Isobutyl-1- methylxanthine全部加入100 ml预先加热至37°C的Preadipocyte Growth Medium-2完全培养基中。（配制的100 ml的Preadipocyte Differentiation Medium将是“2倍浓度”。）
细胞的分化：
1) 向培养板中加入1:1体积比例混合的Preadipocyte Growth Medium-2和Preadipocyte Differentiation Medium，诱导脂肪前体细胞开始分化为脂肪细胞。可通过显微镜观察诱导细胞中的脂质液泡来评估脂肪细胞的分化程度。在诱导后的4至5天，细胞内的脂质液泡将开始出现，并在7至10天内继续增加数量和大小。未经诱导的细胞几乎没有脂质液泡。
为了记录脂肪细胞的分化，可以用PBS小心冲洗培养物，用10%甲醛固定，用Oil Red O染色。可用Poietics™ AdipoRed™试剂（PT-7009）对体外脂肪前体细胞分化进行高通量分析。通过免疫测定或mRNA扩增测定来测量脂肪细胞的分化，以量化脂肪细胞分化的“标志”蛋白质（如瘦素、AP2或PPARγ）的表达。
表1 HWP分化培养材料
参考文献
[1] Tominaga K, Johmura Y, Nishizuka M, Imagawa M. (2004) “Fad24, a mammalian homolog of Noc3p, is a positive regulator in adipocyte differentiation.” J Cell Sci. 117(Pt 25):6217-26.
[2] Reue K, Glueck SB. (2001) “Accumulating evidence for differences during preadipocyte development: Focus on differential gene expression in white and brown preadipocytes.” Physiol Genomics. 7(1):1-2.
[3] Tchkonia T, Tchoukalova YD, Giorgadze N, Pirtskhalava T, Karagiannides I, Forse RA, Koo A, Stevenson M, Chinnappan D, Cartwright A, Jensen MD, Kirkland JL. (2005) “Abundance of Two Human Preadipocyte Subtypes with Distinct Capacities for Replication, Adipogenesis, and Apoptosis Varies among Fat Depots.” Am J Physiol Endocrinol Metab.
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