【PromoCell】PromoCell细胞相关问题及解答（五）

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PromoCell HWP C-28009 HPASMC 皮下脂肪前体脂肪细胞 C-27010 成骨细胞 hMSC C-12217 C-12211 C-23061 C-12001

125.是否可以在胰蛋白酶消化前使用 PBS 代替 HepesBSS 清洗细胞吗？

在细胞解离前，最好使用HepesBSS洗涤细胞。PromoCell的胰蛋白酶0.04%/EDTA 0.03%溶液和TNS溶液都是基于HepesBSS配制的。因此，最好也使用HepesBSS来洗涤细胞。

126.如何检测细胞是否被支原体污染？

有几种不同的方法可以检测支原体感染，例如在琼脂平板上进行培养、在液体或半固体培养基中进行培养、使用DAPI染色、使用支原体特异性抗体、使用生化方法和基于PCR的检测方法。基于PCR的检测方法非常敏感，可以检测到细胞培养中出现的所有支原体种类，并且在3-5 h内完成检测。

127.PromoCell 可以从肥胖BMI或非吸烟者或非糖尿病患者的捐赠者那里提供前脂肪细胞（皮下、内脏）吗？

通常从外科医生那里获得有关组织供体的基本信息，包括年龄、性别和种族。对于许多皮下前体脂肪细胞供体，还了解他们的BMI、头发颜色、皮肤色素沉着情况，有时还了解吸烟习惯或已知疾病（例如糖尿病）。大多数皮下HWP供体年龄在25-65岁之间。内脏HWP供体的年龄大多在20-75岁之间。对于许多细胞批次，我们知道其BMI，有时还了解头发颜色、皮肤色素沉着情况、吸烟习惯或已知疾病（例如糖尿病或COPD）。需要特定的规格，请联系PromoCell的技术支持，以便为您提供合适的HWP细胞批次。

128.PromoCell MSC 生长培养基 2 (C-28009) 可以用于培养大鼠间充质干细胞吗？

可以，根据客户的反馈，我们的MSC Growth Medium 2也适用于大鼠MSCs。大鼠细胞在这种培养基中生长良好，并具有良好的存活率。

129.想通过显微镜分析巨噬细胞，因此必须将细胞铺在纤连蛋白涂层的玻璃上。PromoCell是否测试过巨噬细胞在纤连蛋白涂层玻璃上的生长情况？

PromoCell有测试过巨噬细胞是否能够附着在纤维连接蛋白涂层的玻璃上。

130.PromoCell HPAEC 和 HPASMC 是从肺动脉的近端还是远端获得的？

PromoCell的HPAEC和HPASMC是从肺动脉近端分离得到的。

131.PromoCell是否发现 Nunclon Sphera 板上的球形培养物分散？在整个 3-4 周的培养期间，它们是否能保持附着状态？

为了避免基质的扩散并获得漂亮的球形培养物，在37°C预热培养皿2 h，并迅速转移凝胶至孔中，可在转移凝胶-细胞混合物时细胞操作台中放置加热板。根据PromoCell的测试，发现Nunclon Sphera孔对于类器官系统来说并不理想，因为球形培养物无法保持附着，并能够在底部移动，随着时间的推移，球形培养物变形。成功培养了4周，发现球形培养物形状的改变并不会影响类器官的培养。建议在更换培养基时要特别小心，通过倾斜培养皿并小心移液来去除旧培养基。用真空吸引器可能会损坏或破坏球形结构。

132.PromoCell产品的使有什么限制？

PromoCell产品仅用于体外研究。符合GMP和监管要求的培养基旨在用于研究不适用于直接用于人类或动物。

133.分化成DC的百分比是否因从冷冻保存或是新鲜分离的单核细胞进行分化而存在差异？

在分化为树突状细胞的细胞百分比方面，使用冷冻保存的单核细胞和新鲜分离的单核细胞之间没有显著差异。但是，相比使用新鲜细胞，使用冷冻保存的细胞时，初始细胞损失会较高。也就是说，由于使用新鲜细胞作为起始材料细胞死亡率较低，因此可以期望得到更多分化的细胞。

134.PromoCell产生以下细胞因子的物种是什么：内皮细胞生长培养基补充剂中所包含的碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子？

PromoCell使用大肠杆菌（E.coli）生产成纤维细胞生长因子（basic Fibroblast Growth Factor）和表皮生长因子（Epidermal Growth Factor），这些因子包含在内皮细胞生长培养基补充物中。

135.PromoCell的皮下HWP可以实现的分化率是多少？

使用PromoCell的皮下脂肪前体脂肪细胞（subcutaneous preadipocyte），当在P2（解冻后）诱导分化时，大多数细胞可以达到80-90%以上的分化比率。建议在分化实验中使用未经过4-5次倍增（解冻后最多传代1次）的细胞，因为随着细胞的年龄增长分化比率下降。

136. PromoCell的HDMEC包含2种不同的细胞形态，是怎么做到的？

PromoCell从儿童包皮或成人皮肤的真皮中分离出HDMEC。其纯度大于95%。由于真皮含有血管和淋巴毛细管，HDMEC培养物包含具有不同形态的血管和淋巴微血管内皮细胞。这两种细胞类型具有共同的起源，并可以通过几种标记物进行鉴定。淋巴和血管来源的内皮细胞比例在不同批次之间可能会有所变化，这个比例PromoCell不能确定。

137.PromoCell成骨细胞基础培养基（C-27010）的基础配方是什么？

PromoCell的成骨细胞基础培养基（C-27010）是专为人类成骨细胞培养而优化的培养基配方。其具体成分是保密的。

138.人类间充质干细胞（hMSC）的分化能力随时间而变化吗？应最好在什么时候诱导分化？

PromoCell已测试hMSC向脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞的分化能力，并发现在进行了10次数量倍增（即第5代）后仍然能够获得良好的分化率。然而，随着数量倍增的进行，分化潜能会下降。为了获得最佳的分化率，实验应尽早在培养过程中进行。

139.细胞沉淀含有多少个细胞？

PromoCell的细胞沉淀物由超过100万个细胞制成，并溶解在200 µl的RNAlater中。

140.HDLEC（C-12216，C-12217）和HDBEC（C-12211，C-12225）的标志性Marker是什么？

HDLEC（C-12216，C-12217）和HDBEC（C-12211，C-12225）具有以下特征标记物：HDLEC和HDBEC都表达典型的内皮细胞标记物CD31（=PECAM-1）。HDLEC培养物podoplanin检测呈阳性，这是一种参与淋巴血管形成的跨膜糖蛋白，而HDBEC则是podoplanin阴性。

141.培养PromoCell正常人细胞时，应该多久更换一次生长培养基？

一般情况下，培养基应该每2-3天更换一次。注意：解冻后，第一次更换培养基应在16-24 h后进行，以防止由于残留的冷冻培养基导致细胞损伤。

142.PromoCell 骨骼肌细胞分化培养基（C-23061）中的所有成分是否确定并被定义？

PromoCell的骨骼肌细胞分化培养基完全确定并被定义。SupplementMix（C-39366）由重组人胰岛素组成。

143.如何确定所培养的黑色素细胞培养物中的细胞是黑色素细胞？培养基对黑色素细胞具有选择性？

PromoCell的初级人类黑色素细胞分离和纯化后，通过质量控制检查细胞是否具有典型的形态，并且是否表达Mel-5标记物（Mel-5是一种75 kDa的糖蛋白，通常由正常的黑素细胞表达）。黑色素细胞生长培养基（C-24010）可以促进黑素色细胞在体外的生长。然而，并不能完全阻断其他细胞（如NHEK或NHDF）的生长。因此，从一开始就拥有纯净的黑素细胞培养非常重要。相比之下，黑色素细胞生长培养基M2（C-24300）和M3（C-24310）更加具有选择性，并且可以更好地抑制污染细胞的生长。

144.心肌细胞（C-12810）可以在培养物中生长多长时间？

如果在心肌细胞生长培养基中培养，PromoCell保证心肌细胞（C-12810）可以进行15次细胞数量倍增（PDs）。根据细胞批次和培养条件的不同，细胞可以在培养中维持6-8个传代，相当于1-2个月的时间。

145.否可以将PromoCell冷冻巨噬细胞接种在 96 孔板中？

PromoCell没有尝试将冷冻巨噬细胞放置在96孔板中。然而，根据客户反馈已经成功地在这种类型的板中进行了培养。

146.自己的NHEK（在PromoCell角质形成细胞生长培养基2中分离）适合在PromoCell角质形成细胞生长培养基3中生长吗？

NHEK-GM2（C-12001，C-12003，C-12005，C-12006）也可以在PromoCell角质细胞生长培养基3（C-20021）中生长。按照时间间隔的方案，它们的生长速度略快于角质细胞GM2，并且可以进行超过15个细胞数量的倍增。相反，NHEK-GM3（C-12011，C-12013，C-12015，C-12016）也可以在现有的角质细胞生长培养基2（C-20011）中生长。当使用经典的传代培养方案（密度> 70％-90％）时，它们的生长速度略慢于角质细胞GM3，但也可以达到超过15个数量倍增。

147.PromoCell测试哪些细胞角蛋白对角质细胞进行质控？

在对PromoCell的角质细胞进行质量控制时使用的是一种全细胞角蛋白抗体，而不是特定类型的角蛋白。

148.使用DC Generation Medium XF进行树突状细胞生成培养有哪些优势？

使用PromoCell的DC Generation Medium XF（C-28052）进行树突状细胞生成有以下优势：

1)无异种成分：DC Generation Medium XF具有无异种成分的配方，可以避免使用动物血清或其他动物源性成分，从而减少了潜在的免疫原性和传染性风险。

2)完整的培养基系统：DC Generation Medium XF是一种完整的培养基系统，包含了所有细胞因子，并且是即用型，无需额外添加其他成分。这使得实验操作更加简便，减少了实验中的变异性。

3)高效且可重复：DC Generation Medium XF可以从新鲜分离的外周血单核细胞中有效且体外可重复诱导成moDCs（树突状细胞）。这种培养基可以促进moDCs的成熟和功能的发挥，为研究树突状细胞的生物学特性和应用提供了可靠的工具。

149.PromoCell如何确保周细胞中没有成纤维细胞的污染？成纤维细胞是否通过与抗CD90标记的磁珠分离去除？

PromoCell不使用CD90标记的磁珠对外周细胞进行免疫磁分离，而是通过以下方式排除纤维细胞的污染：

1）在细胞分离后不久，我们的外周细胞培养物中是否存在纤维细胞可以被检测到，因为外周细胞需要经过2周的时间才开始增殖。而纤维细胞则会立即开始增殖并覆盖整个培养物。

2）在质量控制过程中对分离的外周细胞进行了CD146的流式细胞术检测。外周细胞表达CD146，而胎盘纤维细胞则不表达CD146。这样可以鉴定外周细胞的特征，排除纤维细胞的存在。

150.冷冻保存的巨噬细胞复苏后，需要激活多长时间来测量细胞因子的释放？