【PromoCell】人白色前体脂肪细胞（HPW）培养方法

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小白求助前辈指路

人前体脂肪细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人前体脂肪细胞

（HPA）

脂肪细胞在能量储存和代谢中起着重要作用。脂肪细胞分化是一个对代谢稳态和营养信号传导至关重要的发育过程，受到基因表达和信号转导等复杂作用的调控。脂肪组织中的前脂肪细胞在成年期始终存在，并且可增殖和分化为成熟的脂肪细胞，从而增加脂肪组织的质量。体外研究表明，不同组织来源的前脂肪细胞在脂质积累、脂肪生成转录因子表达和TNFα诱导的凋亡方面存在差异。脂肪细胞分化与众多生理和病理过程密切相关，包括脂肪代谢、肥胖、糖尿病、高脂血症和乳腺癌。HPA分离自内脏脂肪或皮下脂肪组织，其CD44和CD90免疫荧光染色呈阳性，且分化后脂质染色呈阳性。

培养方式

Preadipocyte Medium (PAM, Cat. #7211)用于体外培养HPA-v。Preadipocyte Differentiation Medium (PADM, Cat. #7221)用于将前体脂肪细胞体外分化为成熟的脂肪细胞，随后使用Adipocyte Medium (AdM, Cat. #7201)来维持分化后的成熟脂肪细胞。

人白色前体脂肪细胞培养

HPW（# C-12735）分离自皮下组织，HPW（# C-12732）分离自内脏组织。

培养基：用提供的Preadipocyte Growth Medium完全培养基（包含Basal Medium和5% Fetal Calf Serum及其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存（4℃下可保存6周）。

2) T-25中加入10 mL Preadipocyte Growth Medium完全培养基。在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1)将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2)弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按5,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HWP生长培养材料

参考文献

[1] Tominaga K, Johmura Y, Nishizuka M, Imagawa M. (2004) “Fad24, a mammalian homolog of Noc3p, is a positive regulator in adipocyte differentiation.” J Cell Sci. 117(Pt 25):6217-26.

[2] Reue K, Glueck SB. (2001) “Accumulating evidence for differences during preadipocyte development: Focus on differential gene expression in white and brown preadipocytes.” Physiol Genomics. 7(1):1-2.

[3] Tchkonia T, Tchoukalova YD, Giorgadze N, Pirtskhalava T, Karagiannides I, Forse RA, Koo A, Stevenson M, Chinnappan D, Cartwright A, Jensen MD, Kirkland JL. (2005) “Abundance of Two Human Preadipocyte Subtypes with Distinct Capacities for Replication, Adipogenesis, and Apoptosis Varies among Fat Depots.” Am J Physiol Endocrinol Metab.

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