【ScienCell】人脂肪来源的间充质干细胞（HMSC）产品使用攻略
人脂肪来源的间充质干细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人脂肪来源的间充质干细胞
（HMSC）
间充质干细胞（MSC）是一类成体干细胞，具有发展成脂肪、软骨、骨骼、肌腱和肌肉的成熟细胞的潜力。由于MSC在再生医学中有潜力用于替代受损组织而引起关注。在转化生长因子存在下，无血清培养的MSC将分化为软骨细胞。相反，在含有抗坏血酸和地塞米松的血清培养基中，MSC将分化为成骨细胞。MSC具有自我更新和分化成各种间充质组织的能力。凭借其自我更新的能力，MSC有潜力移植到受伤部位或种植在生物仿生支架上，以生成适当的组织构建物。
HMSC分离自人的脂肪组织，其CD73和CD90特异性抗体免疫荧光染色呈阳性，分化后的成熟脂肪细胞可进行油红O染色，分化后的骨细胞可进行茜素红染色。
培养方式
培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2）包被培养瓶。
培养基：HMSC用提的MSCM完全培养基（包含基础培养基、5%FBS、1% MSCGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm2）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL完全培养基（MSCM基础培养基、FBS、MSCGS和P/S按比例混合）。
2) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HMSC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）
换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶皿、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500），将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm2的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HMSC培养材料
参考文献
[1] Kassem M. (2004) “Mesenchymal stem cells: biological characteristics and potential clinical applications.”Cloning Stem Cells. 6(4): 369-74.
[2] Barry FP, Murphy JM. (2004) “Mesenchymal stem cells: clinical applications and biological characterization.” Int J Biochem Cell Biol. 36(4): 568-84.
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