【Lonza】人皮肤成纤维细胞（HDF）产品使用攻略
人皮肤成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人皮肤成纤维细胞
（HDF）
在伤口愈合过程中，皮肤的成纤维细胞从增殖、迁移阶段转变为收缩、基质重塑阶段。此外，它们在应对炎症刺激时分泌大量的透明质酸。HFD呈纺锤形态，其fibronectin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和2% FBS及其他补充剂）培养。
操作步骤：
1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。
2) T-25中加入10 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养。
换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。（传代至单层细胞需要5-9天）
传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。
1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热。
2) 弃除旧培养基，并用HEPES（或等效的无钙镁平衡盐溶液）清洗细胞后吸除，加入Trypsin-EDTA溶液覆盖细胞层（约25 µl/cm2）。在室温下孵育3 min，然后在显微镜下观察。如果细胞未有90%以上脱离，继续孵育并每 min观察一次（孵育细胞时间不要超过15 min）。一旦> 90%的细胞变圆并脱离（轻拍培养瓶或培养皿可以加速细胞脱离），将培养瓶竖立，加入预热的完全培养基至每个培养瓶（约0.2 ml/cm2）。用移液管在细胞层表面多次吸液，使溶液均匀分散，并将细胞悬液转移至离心管中。300 × g的速度，在室温下离心细胞5 min。去除上清液，获得细胞沉淀。加入1ml预热的完全培养基，重悬细胞沉淀，对细胞进行计数。按2,500 cells/cm2的细胞密度进行接种。接种后的细胞置于细胞培养箱中进行培养。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HDF培养材料
参考文献
[1] Stair S, Carlson KW, Shuster S, Wei ET, Stern R. (2002) “Mystixin peptides reduce hyaluronan deposition and edema formation.” Eur J Pharmacol. 450: 291-6.
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