【PromoCell】人真皮微血管内皮细胞（HDMEC）产品使用攻略

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人真皮微血管内皮细胞 HDMEC 人原代细胞 Human Primary cells 皮肤细胞系统 Dermal Cell System Promocell Dermal Microvascular Endothelial Cells

小白求助前辈指路

人真皮微血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人真皮微血管内皮细胞

（HDMEC）

皮肤的血管由多种细胞和非细胞元素组成，其中主要细胞类型是内皮细胞。内皮细胞形成了血管内、外间隔界面，对细胞和大分子物质在这两个间隔之间的扩散起到选择性屏障的作用。血管的内皮细胞与体内其他部位的内皮细胞具有共同特征，通过控制细胞增殖、静止、凋亡和衰老的信号通路，血管内皮细胞也呈现出显著的表型和功能异质性，从而使皮肤微血管在维持和重塑之间保持动态平衡，并积极参与各种生理过程，包括伤口愈合、止血控制、温度调节和炎症/白细胞转运的调节。HDMEC的vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

HDMEC培养方式

Human Dermal Microvascular Endothelial Cells（# C-12215，C-12212，C-12210）分离自人不同部位的真皮组织。

培养基：用提供的Endothelial Cell Growth Medium MV完全培养基（包含Basal Medium和5% Fetal Calf Serum及其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存（4℃下可保存6周）。

2) T-25中加入10 mL Endothelial Cell Growth Medium MV完全培养基。在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按10,000~20,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HDMEC培养材料