【PromoCell】人表皮角质形成细胞（HEK）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人表皮角质形成细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人表皮角质形成细胞

（HEK）

皮肤的表皮层在抵御外界环境的侵害方面提供了重要的保护屏障功能。表皮中的主要细胞类型是角质细胞，它们位于分层鳞状上皮组织中。角质细胞是以角蛋白命名的，角蛋白是该细胞中最丰富的蛋白质。角质细胞的祖细胞位于表皮的基底层，进行分裂，然后会分化并向表皮表面迁移，最终永久退出细胞周期。角质细胞的增殖、分化和程序性细胞死亡是复杂而精心协调的过程。除了其保护功能外，角质细胞还表达粘附分子和细胞因子，在皮肤先天免疫、组织稳态、伤口愈合、肿瘤发展发挥重要作用。HEK分离自成人皮肤，其cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

Human Epidermal Keratinocytes分离自幼年包皮（# C-12001）和成年皮肤（C-12003）的皮肤。

培养基：用提供的Keratinocyte Growth Medium 2（Serum-free）完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存（4℃下可保存6周）。

2) T-25中加入10 mL Keratinocyte Growth Medium 2（Serum-free）完全培养基。在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按5,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HEK培养材料

参考文献

[1] Eckert RL, Efimova T, Dashti SR, Balasubramanian S, Deucher A, Crish JF, Sturniolo M, Bone F. (2002) “Keratinocyte survival, differentiation, and death: many roads lead to mitogen-activated protein kinase.” J Investig Dermatol Symp Proc. 7: 36-40.

[2] Song PI, Park YM, Abraham T, Harten B, Zivony A, Neparidze N, Armstrong CA, Ansel JC. (2002) “Human keratinocytes express functional CD14 and toll-like receptor 4.” J Invest Dermatol. 119: 424-32.

[3] de Panfilis G, Semenza D, Lavazza A, Mulder AA, Mommaas AM, Pasolini G. (2002) “Keratinocytes constitutively express the CD95 ligand molecule on the plasma membrane: an in situ immunoelectron microscopy study on ultracryosections of normal human skin.” Br J Dermatol. 147: 7-12.

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