【PromoCell】人皮肤成纤维细胞（HDF）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人皮肤成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人皮肤成纤维细胞

（HDF）

在伤口愈合过程中，皮肤的成纤维细胞从增殖、迁移阶段转变为收缩、基质重塑阶段。此外，它们在应对炎症刺激时分泌大量的透明质酸。HFD呈纺锤形态，其fibronectin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

Human Dermal Fibroblasts（# C-12302）分离成人皮肤组织。

培养基：用提供的Fibroblast Growth Medium 2完全培养基（包含Basal Medium和2% Fetal Calf Serum及其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存（4℃下可保存6周）。

2) T-25中加入10 mL Fibroblast Growth Medium 2完全培养基。在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按3,500~7,000 cells/cm2接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HDF培养材料

参考文献

[1] Stair S, Carlson KW, Shuster S, Wei ET, Stern R. (2002) “Mystixin peptides reduce hyaluronan deposition and edema formation.” Eur J Pharmacol. 450: 291-6.

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