【PromoCell】人表皮黑色素细胞（HEM）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人表皮黑色素细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人表皮黑色素细胞

（HEM）

黑色素细胞是神经嵴来源的细胞，通过黑色素合成产生黑色素。黑色素细胞分布在多个组织中，包括表皮、眼睛、内耳和软脑膜。在胚胎发育过程中，黑色素细胞的迁移、增殖或存活的失调会导致这些组织的先天性疾病，如Tietz综合征、Waardenburg综合征和斑块状白癜风。在皮肤表皮的底层，黑色素细胞合成并将深色黑色素转移给周围的角质细胞，赋予皮肤色素，同时合成的黑色素能阻挡UV-B光线，保护真皮免受太阳照射引起的光损伤。HEM可应用于研究黑色素瘤、内耳稳态、白癜风和杜兴氏肌萎缩症中的线粒体功能障碍。HEM的S100β和NGF-receptor (p75)特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

Human Epidermal Melanocytes（# C-12402）分离自幼年包皮。

培养基：用提供的Melanocyte Growth Medium M2（Serum-free，PMA (Phorbol Myristate Acetate)-free）完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存（4℃下可保存6周）。

2) T-25中加入10 mL Melanocyte Growth Medium M2（Serum-free）完全培养基。在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按5,000-10,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HEM培养材料

参考文献

[1] Li J, Song JS, Bell RJ, Tran TN, Haq R, Liu H, Love KT, Langer R, Anderson DG, Larue L, Fisher DE. (2012) “YY1 regulates melanocyte development and function by cooperating with MITF.” PLoS Genet. 8: e1002688.

[2] Neng L, Zhang F, Kachelmeier A, Shi X. (2013) “Endothelial cell, pericyte, and perivascular resident macrophage-type melanocyte interactions regulate cochlear intrastrial fluid-blood barrier permeability.” J Assoc Res Otolaryngol. 14: 175-85.

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[4] Pellegrini C, Zulian A, Gualandi F, Manzati E, Merlini L, Michelini ME, Benassi L, Marmiroli S, Ferlini A, Sabatelli P, Bernardi P, Maraldi NM. (2013) “Melanocytes--a novel tool to study mitochondrial dysfunction in Duchenne muscular dystrophy.” J Cell Physiol. 228: 1323-31.

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