【ScienCell】人表皮黑色素细胞（HEM）产品使用攻略

浏览量：85

人表皮黑色素细胞 HEM 细胞产品人原代细胞 Human Primary cells 皮肤细胞系统 Dermal Cell System Sciencell Epidermal Melanocytes Melanocyte Medium 2201

小白求助前辈指路

人表皮黑色素细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人表皮黑色素细胞

（HEM）

黑色素细胞是神经嵴来源的细胞，通过黑色素合成产生黑色素。黑色素细胞分布在多个组织中，包括表皮、眼睛、内耳和软脑膜。在胚胎发育过程中，黑色素细胞的迁移、增殖或存活的失调会导致这些组织的先天性疾病，如Tietz综合征、Waardenburg综合征和斑块状白癜风。在皮肤表皮的底层，黑色素细胞合成并将深色黑色素转移给周围的角质细胞，赋予皮肤色素，同时合成的黑色素能阻挡UV-B光线，保护真皮免受太阳照射引起的光损伤。HEM可应用于研究黑色素瘤、内耳稳态、白癜风和杜兴氏肌萎缩症中的线粒体功能障碍。HEM的S100β和NGF-receptor (p75)特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HEM用提供的MelM完全培养基（包含基础培养基、0.5% FBS、1% MelGS和1%P/S）培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HEM加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HEM培养材料

参考文献

[1] Li J, Song JS, Bell RJ, Tran TN, Haq R, Liu H, Love KT, Langer R, Anderson DG, Larue L, Fisher DE. (2012) “YY1 regulates melanocyte development and function by cooperating with MITF.” PLoS Genet. 8: e1002688.

[2] Neng L, Zhang F, Kachelmeier A, Shi X. (2013) “Endothelial cell, pericyte, and perivascular resident macrophage-type melanocyte interactions regulate cochlear intrastrial fluid-blood barrier permeability.” J Assoc Res Otolaryngol. 14: 175-85.

[3] Elassiuty YE, Klarquist J, Speiser J, Yousef RM, El Refaee AA, Hunter NS, Shaker OG, Gundeti M, Nieuweboer-Krobotova L, Le Poole IC. (2011) “Heme oxygenase-1 expression protects melanocytes from stressinduced cell death: implications for vitiligo.” Exp Dermatol. 20: 496-501.

[4] Pellegrini C, Zulian A, Gualandi F, Manzati E, Merlini L, Michelini ME, Benassi L, Marmiroli S, Ferlini A, Sabatelli P, Bernardi P, Maraldi NM. (2013) “Melanocytes--a novel tool to study mitochondrial dysfunction in Duchenne muscular dystrophy.” J Cell Physiol. 228: 1323-31.

其他细胞品类