【ATCC】人表皮角质形成细胞（HEK）培养基的配制

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人原代细胞 Human Primary cells 皮肤细胞系统 Dermal Cell System ATCC 人表皮角质形成细胞 Epidermal Keratinocytes Dermal Cell Basal Medium

小白求助前辈指路

人表皮角质形成细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人表皮角质形成细胞

（HEK）

皮肤的表皮层在抵御外界环境的侵害方面提供了重要的保护屏障功能。表皮中的主要细胞类型是角质细胞，它们位于分层鳞状上皮组织中。角质细胞是以角蛋白命名的，角蛋白是该细胞中最丰富的蛋白质。角质细胞的祖细胞位于表皮的基底层，进行分裂，然后会分化并向表皮表面迁移，最终永久退出细胞周期。角质细胞的增殖、分化和程序性细胞死亡是复杂而精心协调的过程。除了其保护功能外，角质细胞还表达粘附分子和细胞因子，在皮肤先天免疫、组织稳态、伤口愈合、肿瘤发展发挥重要作用。HEK分离自成人皮肤，其cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

完全培养基的配制

1)从冰箱中取出生长试剂盒Keratinocyte Growth Kit (ATCC PCS-200-040)暂时储存温度为-20℃，长期保存温度为-80℃），确保所有组分的盖子都是紧闭的。在将生长试剂盒的组分加入基础培养基之前，将其解冻。需要将L-谷氨酰胺组分在37°C的水浴中加热，并摇动以充分混匀。

2)取出一瓶Dermal Cell Basal Medium（485 mL，2-8℃储存）。

3)使用70%乙醇喷雾剂对生长试剂盒组分瓶和基础培养基瓶的外部表面进行消毒。

4)层流罩或生物安全柜中无菌操作，使用单独的无菌移液管将每个生长试剂盒组分转移到基础培养基瓶中，并充分混匀，避免气泡产生，2-8℃避光保存（可稳定储存30天）。

5)抗菌剂和酚红不是必需的，但如果需要的话可以添加。建议将可选组分（GA溶液或PSA溶液）的体积加入完全生长培养基中，具体建议如下。

①庆大霉素-两性霉素B溶液（Gentamicin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：庆大霉素：10 µg/mL，两性霉素B：0.25 µg/mL）。

②青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：青霉素：10 Units/mL，链霉素：10 µg/mL，两性霉素B：25 ng/mL）。

③酚红（Phenol Red），0.5 mL（最终浓度：33 µM）。

表1 HEK培养材料