【Lonza】人骨骼肌肌成纤维细胞(HSMM)产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人骨骼肌肌成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人骨骼肌肌成纤维细胞

（HSMM）

HSMMs分离自人上臂或腿部肌肉组织，可分化形成肌管

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入5 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中（3,500 cells/cm²的密度），并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞。随着细胞数量的增加，培养基体积按按以下方式换液：细胞汇合度25%以下按1 mL /5 cm² 换液；汇合度达到25%-45%按1.5 mL /5 cm²换液；汇合度超过45%，按2 mL/5 cm²换液。

传代：当细胞密度80%~90%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用5 ml DPBS清洗细胞后吸除，加入2 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞（2-6 min），用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入4 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并快速转移到15 mL离心管中。用2 ml HEPES收集残余的细胞并转移至离心管中（剩余的细胞量不超过5%）。以220×g的速度离心细胞5min。弃掉上清液，加入2-3 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞并对活细胞计数。此时如果需要种植到培养板中推荐接种密度为10,000 cells/cm²（或根据实验设计安排种植密度），并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HSMM培养材料