【Lonza】人关节软骨细胞（HAC-kn）产品使用攻略

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人关节软骨细胞 HAC-kn 细胞产品人原代细胞 Human Primary cells 骨骼细胞系统 Skeletal Cell System Lonza Chondrocytes-articular Basal Medium Chondrocyte Growth Medium CC-3216

小白求助前辈指路

人关节软骨细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人关节软骨细胞

（HAC-kn）

关节软骨覆盖在骨头之间的关节处，不含血管、淋巴管或神经纤维，仅由一种特殊的细胞类型组成，即软骨细胞，它们产生和维护软骨的一系列胶原和非胶原的胞外基质大分子，包括II型胶原、聚集素、连接蛋白、IX型胶原和XI型胶原和蛋白聚糖（主要是聚硫酸软骨素）；此外，能够产生和响应大量的肽生长因子和细胞因子，包括类胰岛素生长因子-1和白细胞介素-1。软骨细胞增殖和分化的调控对于脊椎动物骨骼的协调发育至关重要。关节软骨耐磨性高，再生质量差，经分化后，对II型胶原和硫酸化蛋白聚糖染色呈阳性。软骨细胞的培养是研究软骨再生和修复、细胞因子和生长因子对软骨的影响、特定基因调控以及关节炎病理生理学的优秀模型。HC-a分离自人关节软骨，其S100B和type II collagen特异性荧光抗体染色呈阳性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入5 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中（按10,000 cells/cm²的密度），并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞。随着细胞数量的增加，培养基体积按按以下方式换液：细胞汇合度25%以下按1 mL /5 cm² 换液；汇合度达到25%-45%按1.5 mL /5 cm²换液；汇合度超过45%，按2 mL/5 cm²换液。

传代：当细胞密度80%~90%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用5 ml HEPES清洗细胞后吸除，加入3 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞（2-6 min），用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入6 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并快速转移到15 mL离心管中。用2 ml HEPES收集残余的细胞并转移至离心管中（剩余的细胞量不超过5%）。以210×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入2-3 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞并对活细胞计数。按10,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。（传代后至单层细胞需要5-9天）

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HAC-kn培养材料

参考文献

[1] Kolettas E, Muir HI, Barrett JC, Hardingham TE. (2001) “Chondrocyte phenotype and cell survival are regulated by culture conditions and by specific cytokines through the expression of Sox-9 transcription factor.” Rheumatology, 40(10): 1146-1156.

[2] Fosang A, Tyler JA, Hardingham TE. (1991) “Effect of interleukin-1 and insulin-like growth factor-1 on the release of proteoglycan components and hyaluronan from pig articular cartilage in explant culture.” Matrix 11:17-24

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