【ScienCell】人滑膜细胞（HS）产品使用攻略
人滑膜细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人滑膜细胞
（HS）
人滑膜细胞（HS）是健康滑膜组织中主要的细胞类型，呈纤维母细胞样。滑膜细胞形成了一个独特的结构，称为滑膜内衬层。滑膜细胞负责吸收关节腔内的液体和产生滑液，并控制血液/滑液交换。滑膜细胞增殖，表现出无需附着的生长，并分泌多种能促进炎症和关节破坏的效应分子。此外，它们是一个复杂的自分泌和旁分泌作用因子网络的一部分。滑膜细胞为滑膜组织的组织结构和形态发生提供了新的见解，并且是关节炎症潜在的治疗靶细胞。HS分离自人的滑膜，其CD 90和fibronectin的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HS用提供的SM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% SGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HS加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HS培养材料
参考文献
[1] Barland P, Novikoff AB, Hamerman D. (1962) “Electron microscopy of the human synovial membrane.” J Cell Biol. 14:207–220.
[2] Kiener HP, Brenner MB. (2005) “Building the synovium: cadherin-11 mediates fibroblast-like synoviocyte cell-tocell adhesion.” Arthritis Res Ther. 7(2): 49–5
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