【PromoCell】人关节软骨细胞（HC）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人关节软骨细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人关节软骨细胞

（HC）

关节软骨覆盖在骨头之间的关节处，不含血管、淋巴管或神经纤维，仅由一种特殊的细胞类型组成，即软骨细胞，它们产生和维护软骨的一系列胶原和非胶原的胞外基质大分子，包括II型胶原、聚集素、连接蛋白、IX型胶原和XI型胶原和蛋白聚糖（主要是聚硫酸软骨素）；此外，能够产生和响应大量的肽生长因子和细胞因子，包括类胰岛素生长因子-1和白细胞介素-1。软骨细胞增殖和分化的调控对于脊椎动物骨骼的协调发育至关重要。关节软骨耐磨性高，再生质量差，经分化后，对II型胶原和硫酸化蛋白聚糖染色呈阳性。软骨细胞的培养是研究软骨再生和修复、细胞因子和生长因子对软骨的影响、特定基因调控以及关节炎病理生理学的优秀模型。Human Chondrocytes（#C-12710）分离自人膝关节或髋关节软骨组织。

培养方式

Human Chondrocytes（#C-12710）分离自人膝关节或髋关节软骨组织。

培养基：用提供的Chondrocyte Growth Medium（完全培养基包含Basal Medium和10% Fetal Calf Serum）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将Fetal Calf Serum按比例加入到Basal Medium。

2) T-25中加入10 mL Chondrocyte Growth Medium完全培养基，在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。

1) 将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按10,000~20,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HC培养材料

参考文献

[1] Kolettas E, Muir HI, Barrett JC, Hardingham TE. (2001) “Chondrocyte phenotype and cell survival are regulated by culture conditions and by specific cytokines through the expression of Sox-9 transcription factor.” Rheumatology, 40(10): 1146-1156.

[2] Fosang A, Tyler JA, Hardingham TE. (1991) “Effect of interleukin-1 and insulin-like growth factor-1 on the release of proteoglycan components and hyaluronan from pig articular cartilage in explant culture.” Matrix 11:17-24

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