【Lonza】人树突状细胞(HDC)产品使用攻略
【Lonza】人树突状细胞(HDC)产品使用攻略
人树突状细胞培养不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!
人树突状细胞
(HDC)
树突状细胞(DCs)是免疫系统的信使细胞,通过处理来自病原体的抗原并将抗原呈递给T细胞,以启动免疫应答。正常人树突状细胞具有一系列特定的表面标记物,包括CD11c+、CD86+、CD80+、HLADR+和CD14-。这些细胞在适当的细胞因子(IL-4和GM-CSF)的培养条件下可以存活长达7天,以保持细胞处于未成熟的树突状细胞(iDCs)状态。通过添加TNF-α和IL-1β,细胞可以进一步分化为成熟的树突状细胞。
HDC分化培养方式
HDC在培养基中培养4天后,HDC细胞的CD11c和CD86表面抗原阳性率≥90%。
操作步骤:
1) 细胞解冻之前,将LGM-3™平衡至室温。
2) 解冻后的细胞(解冻时间不超过2 min)转移至50 ml离心管中,并用LGM-3™缓慢稀释至25 ml,400×g室温离心10 min。
3) 吸除上清培养基,用LGM-3™重新悬浮细胞,使其达到适当的密度,(推荐密度为2~5×104cells/cm2)。
4) 添加细胞因子轻柔混匀后加入至培养容器中(IL-4(50 ng/ml)和GM-CSF(50 ng/ml))。并放于细胞培养箱中培养4天后便可用于实验。
生长条件:在CO2浓度为5%,温度为37℃,相对湿度(RH)为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HDC培养材料
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