【Lonza】人外周血单核细胞(PBMC)产品使用攻略
【Lonza】人外周血单核细胞(PBMC)产品使用攻略
人外周血单核细胞培养不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!
人外周血单核细胞
(PBMC)
外周血单个核细胞(PBMC)是一种混合的单核细胞群体。可以进一步纯化以分离出单个细胞类型,如自然杀伤细胞、T细胞和B细胞。此外,PBMC是单核细胞的丰富来源,可以通过与各种细胞因子的培养来使其分化为巨噬细胞或树突状细胞。
培养方式
操作步骤:
1) 将LGM-3™培养基平衡至室温。添加DNase I(20 U/ml)。
2) 解冻后的细胞(解冻时间不超过2 min)转移到50 ml离心管中。
3) 向离心管中加入1 ml培养基后,将解冻后的细胞转移至离心管中。逐滴加入培养基至离心管中直到总体积达到50 ml,并每次加入培养基后轻轻旋转离心管。
4) 室温200×g离心15 min。
5) 小心地用移液管除去除上清(保留2 ml)。轻轻悬浮细胞沉淀并计数。
6) 用LGM-3™重新悬浮细胞,使其达到适当的密度(推荐密度为1~5×106cells/cm2)并加入培养容器中,置于细胞培养箱中培养(可根据实验需求添加细胞因子)。
生长条件:在CO2浓度为5%,温度为37℃,相对湿度(RH)为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 hPBMC培养材料
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