【Lonza】人CD4+ T细胞产品使用攻略
人CD4+ T细胞培养不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!
人CD4+ T细胞
CD4+ T细胞也被称为辅助T细胞,因为它们对免疫系统中的其他细胞起着调节作用,促进免疫应答的各个方面,包括免疫球蛋白亚型转换和抗体应答的亲和力成熟,巨噬细胞的激活以及自然杀伤细胞和细胞毒性T细胞的活性增强。
培养方式
操作步骤:
1) 将含有10% FBS或1% BSA的培养基室温平衡。将细胞置于37°C的水浴中解冻(不超过2 min)。用70%乙醇擦拭瓶子外部。
2) 向50 ml离心管中加入1 ml培养基后,将解冻后的细胞转移至离心管中,少于100万的个细胞可使用15 ml离心管。
3) 逐滴加入培养基至细胞悬液中,滴加过程中旋转离心管,直到总体积达到5 ml(约3 min)。
4) 用巴氏管按1 ml到2 ml量缓慢加入的培养基,直到达到离心管的总体积,并在每次加入培养基的过程中轻轻旋转(约5-10 min)。
5) 室温200×g离心15 min。
6) 小心地用移液管除去大部分上清液并保存在第二个管子中,留下少量液体以保持细胞沉淀不被干扰。轻轻悬浮细胞沉淀。如果使用50 ml离心管,请将细胞转移到15 ml离心管中,并用5 ml培养基冲洗50 ml离心管并慢慢加入5 ml到细胞悬浮液中并轻轻旋转。
7) 用巴氏管按1 ml到2 ml量缓慢加入培养基,直到达到离心管总体积15 ml,并在每次加入培养基的过程中轻轻旋转。
8) 室温200×g离心15 min。
9) 小心地用移液管除去除上清液(保留2 ml)。轻轻悬浮细胞沉淀并计数。
10) 用LGM-3™重悬细胞沉淀以达到合适的细胞密度,可根据实验需求添加细胞因子。
生长条件:在CO2浓度为5%,温度为37℃,相对湿度(RH)为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 CD4+ T培养材料
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