【Serumwerk】Lymphoprep™产品使用说明

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Serumwerk Bernburg AG

Serumwerk Bernburg AG 1856 1858 Lymphoprep™

产品信息

1.组成

泛影葡胺钠 9.1% (w/v) ，多糖5.7% (w/v)

2. 理化特性

密度：1.077 ± 0.001g/ml

渗透压：290 ± 15 mOsm

内毒素水平：< 1.0 IU/ml

3. 稳定性和储存

保持无菌和防止光照条件下，Lymphoprep™可稳定储存3年。Lymphoprep™应存储在4℃到30℃。

产品介绍

Arne Bøyum博士于1968年报道了一种简单有效的从人血液中分离单个核细胞的方法。在超过45年的时间里，一种被称为lymphooprep™的商业培养基被广泛用于分离这些细胞。单核细胞(单核细胞和淋巴细胞)的浮力密度低于红细胞和多形核白细胞(PMN)。绝大多数单核细胞的密度低于1.077 g/ml。因此，这些细胞可以在密度为1.077 g/ml的等渗培养基上离心分离，这允许红细胞和PMN通过培养基沉淀，同时将单核细胞保留在样品/培养基交界处。

为了获得最大的产量，重要的是血液样本在应用于梯度之前用生理盐水1:1稀释。单核细胞悬浮液中红细胞的污染通常在细胞总数的3- 10%之间。在强免疫抑制治疗期间，一些未成熟的PMN可能与淋巴细胞结合。当使用肝素化的血液时，必须去除大部分血小板，以避免细胞毒性试验中的抑制作用。

分离程序

(1) 将血液收集到含有抗凝剂(EDTA，肝素，ACD)的管中或使用去纤血。

(2) 加入等体积的0.9% NaCl稀释血液。

(3) 在12-15毫米离心管中，小心地将6ml稀释后的血液与3ml lymphooprep™层合。或者，也可以在下层进行淋巴处理。避免血液与分离液混合。盖上管子以防止气溶胶的形成。

(4) 在室温(约20°C)下，在摆动转子中以800 x g离心20分钟。如果血液储存超过2小时，增加离心时间至30分钟。

(5) 离心后，单个核细胞在样品/介质界面处形成一条明显的条带，如图所示。最好使用巴斯德移液器将细胞从界面移除，而不移除上层。

(6) 将收获的部分用0.9% NaCl或培养基稀释，降低溶液的密度，250 × g离心10分钟使细胞成球。