【Serumwerk】泡沫细胞（Foam cells）和白细胞（leukocyte）分离
泡沫细胞和白细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
泡沫细胞（Foam cells）分离
对含有病变的材料进行胶原处理并筛分后，将洗涤的细胞在0.5、1.0、5.0、10和30% (w/v) NycodenzⓇ的5层不连续NycodenzⓇ梯度上分层，并在10℃下以1200 g离心15 min。泡沫细胞在5% ~ 10%界面呈带状分布。用缓冲盐水、平衡盐溶液或培养基稀释OptiPrep™，以得到相同的% (w/v)碘克沙醇溶液，可以产生完全相同的密度梯度。
白细胞（leukocyte）分离
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇瓶）或NycodenzⓇ粉末
B. 稀释剂（OptiPrep™）：0.85%（w/v）氯化钠，6 mM氯化钾，10 mM HEPES-NaOH，pH 7.4
C. 稀释剂（NycodenzⓇ）：6 mM氯化钾，10 mM HEPES-NaOH，pH 7.4
D. 高渗稀释液：3 mM氯化钾，0.3mM Na2-EDTA，0.3mM氯化钙，1.245 M氯化钠，5 mM HEPES-NaOH ，pH 7.4。
E. 灌洗液：克雷布斯林格氏盐溶液，用25 mM HEPES缓冲至pH值7.4，含1%（w/v）牛血清白蛋白。
试验方法
1. OptiPrep™：用5.4 ml溶液B稀释4.6 ml溶液A，得到约1.15 g/ml的工作液。
2. NycodenzⓇ制作100毫升的1.15 g/ml工作溶液，放置大约。将50 ml溶液C存于150 ml烧杯中，置于加热的磁力搅拌器上，设置为约。50℃并以少量添加27.6 g NycodenzⓇ直至溶解。让溶液冷却到室温，然后用水配制多达100毫升。必要时进行过滤消毒。
3. 将所选工作液分别与溶液D和水按0.7:0.08:0.22混合，组成1.106 g/ml和400 mOsm密度屏障;构成1.091 g/ml和325 mOsm密度屏障的使用比为0.6:0.06:0.34。
4. 收集腹膜细胞于溶液E中，于20℃ 300 g离心10 min;然后用溶液E洗涤细胞一次，将细胞重新悬浮于此培养基中至约107个/ml。
5. 用3 ml密度屏障使7 ml细胞悬液下层并在700 g下在20℃离心20 min。单核细胞和中性粒细胞穿过密度屏障分离。
方法注释
1. 从OptiPrep™配制1.15 g/ml工作溶液比从NycodenzⓇ粉末更容易，两种溶液将具有相同的物理性质。分离结果有差异的可能性很小，但应强调的是OptiPrep™的使用尚未经过验证。
2. NycoprepⓇ1.15含有3 mM KCl, 5 mM Tris-HCl, pH 7.5和0.3 mM can2edta。纳入后者以改进溶液的长期稳定性。它已从工作解决方案中被省略。然而，如果EDTA的浓度对分离很重要，则0.6 mM CaNa2EDTA或Na2EDTA可包含在溶液B或C中。
3. 作者报告了纯度约95%的单个核细胞(上带)和PMNs(下带)。
最近的研究表明，使用碘克沙醇梯度纯化兔巨噬细胞时，这些细胞可被人重组GM-CSF和M-CSF诱导。Radovanovic等展示了摄入富含硅的水对慢性铝暴露的啮齿类动物腹腔巨噬细胞的系统性炎症和功能特征的影响。
Nycodenz® 产品信息
理化特性
●分子量：821 g/mol
●密度：2.1 g/ml
●溶于水浓度：80% (w/v)，溶于水密度：1.426 g/ml
稳定性和储存
●固体形式的Nycodenz®在室温和避光条件下可稳定保存2年。
产品特点
●非离子型，对细胞无毒，代谢惰性
●可用于细胞、亚细胞细胞器和膜、大分子和病毒的分离
●形成真正的溶剂。因此，分离后很容易从细胞中除去培养基
●能抵抗细菌降解
●溶液可以进行高压灭菌
使用方法
1. 通过离心在原位形成的(自形成渐变)。
2. 将所需浓度的溶液分层放入适当的离心管和允许的解决方案扩散。使用Nycodenz®等渗溶液梯度可以在45分钟内简单地准备好。
3. 冷冻和解冻。
4. 梯度混合器。
应用
Nycodenz®可用于核酸、蛋白质、多糖和核蛋白的分离。此外，在等渗或轻度高渗条件下，大多数类型的亚细胞器都可以在Nycodenz®的梯度上成功分离。Nycodenz®渗透压低，无毒，是分离完整活细胞的理想介质。Nycodenz®的低粘度及其非离子特性已经证明了Nycodenz®在病毒和细菌的分离和纯化方面是有用的。
可分离：
哺乳动物和非哺乳动物的细胞
亚细胞的细胞器
非哺乳动物来源的细胞器
亚细胞的膜
蛋白质和蛋白质复合物
核糖核蛋白
病毒
Nycodenz®可以通过透析、超滤或凝胶过滤从样品中去除。细胞、亚细胞细胞器和其他颗粒物质可以通过离心从Nycodenz®中分离出来，而不会有被Nycodenz®污染的风险。
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