【Serumwerk】疟疾寄生虫（Malaria parasites）分离
疟疾寄生虫（恶性疟原虫、柏氏疟原虫、间日疟原虫和约氏疟原虫）分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
疟疾寄生虫（恶性疟原虫、柏氏疟原虫、间日疟原虫和约氏疟原虫）分离
（Malaria parasites (Plasmodium falciparum, P. berghei, Plasmodium vivax, and P. yoelii)）
溶液制备
NycodenzⓇ溶液现在必须通过在合适的介质中溶解NycodenzⓇ粉末来制备。我们建议制作30% (w/v) NycodenzⓇ原液。向50 ml水(在60℃下轻轻搅拌)缓慢添加30 g NycodenzⓇ直至完全溶解。使溶液冷却至室温;加入10 ml 100 mM Tris, HEPES或Tricine;调节pH值至7.0-7.5，加水达100毫升。如果需要储存，此原液可经过过滤灭菌。当用平衡盐溶液、缓冲盐溶液或培养基稀释，以产生较低密度的溶液时，这些溶液与哺乳动物血浆等渗。
试验方法
碘克沙醇很有可能在这些应用中取代NycodenzⓇ。当然，碘克沙醇作为60% (w/v)溶液(OptiPrep™)的可用性使梯度溶液制备比使用NycodenzⓇ更容易。碘克沙醇和NycodenzⓇ溶液的相同% (w/v)浓度有几乎相同的密度，但溶液NycodenzⓇ是高渗超过1.15 g/ml，相比之下，碘克沙醇可以在所有密度等渗。NycodenzⓇ溶液的渗透压浓度是否在实现本应用说明书中所描述的分离中起重要作用尚不清楚。只能根据经验进行比较。
NycodenzⓇ的标准原液为1.15 g/ml，其中含有5 mM Tris-HCl、0.3 mM Ca/Na2 EDTA和3 mM KCl，用PBS 1:1稀释。将30 ml含裂殖体的血液与10 ml这种培养基混合，450 g离心20 min，在界面处条带裂殖体。NycodenzⓇ对裂殖体的毒性比PercollⓇ小得多。
最近，恶性疟原虫和伯氏疟原虫已在碘克沙醇梯度中纯化。Cha等人描述了15.4%和10.2%碘克沙醇的两层梯度的使用，在16500 g离心10分钟。微生物在较低密度层的顶部条带。
Nycodenz® 产品信息
理化特性
●分子量：821 g/mol
●密度：2.1 g/ml
●溶于水浓度：80% (w/v)，溶于水密度：1.426 g/ml
稳定性和储存
●固体形式的Nycodenz®在室温和避光条件下可稳定保存2年。
产品特点
●非离子型，对细胞无毒，代谢惰性
●可用于细胞、亚细胞细胞器和膜、大分子和病毒的分离
●形成真正的溶剂。因此，分离后很容易从细胞中除去培养基
●能抵抗细菌降解
●溶液可以进行高压灭菌
使用方法
1. 通过离心在原位形成的(自形成渐变)。
2. 将所需浓度的溶液分层放入适当的离心管和允许的解决方案扩散。使用Nycodenz®等渗溶液梯度可以在45分钟内简单地准备好。
3. 冷冻和解冻。
4. 梯度混合器。
应用
Nycodenz®可用于核酸、蛋白质、多糖和核蛋白的分离。此外，在等渗或轻度高渗条件下，大多数类型的亚细胞器都可以在Nycodenz®的梯度上成功分离。Nycodenz®渗透压低，无毒，是分离完整活细胞的理想介质。Nycodenz®的低粘度及其非离子特性已经证明了Nycodenz®在病毒和细菌的分离和纯化方面是有用的。
可分离：
哺乳动物和非哺乳动物的细胞
亚细胞的细胞器
非哺乳动物来源的细胞器
亚细胞的膜
蛋白质和蛋白质复合物
核糖核蛋白
病毒
Nycodenz®可以通过透析、超滤或凝胶过滤从样品中去除。细胞、亚细胞细胞器和其他颗粒物质可以通过离心从Nycodenz®中分离出来，而不会有被Nycodenz®污染的风险。
相关产品推荐
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
