【Serumwerk】原生质体（Bioplast）分离
原生质体分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
原生质体（Bioplast）分离
大麦谷物糊粉的原生质体（Protoplasts of the barley grain aleurine）分离
在原生质体的制备中使用Gamborg B5培养基(最少的有机物)，但在梯度分离中，这补充了各种添加剂。三种梯度溶液的密度为1.26 g/ml (5 g NycodenzⓇ+ 10 g培养基)，1.18 g/ml (3 g NycodenzⓇ+ 10 g培养基)和1.08 g/ml(培养基中的山梨醇)，渗透压为1150-1200mmol/kg。原生质体非常温和地悬浮在密度最大的培养基中，两种密度较低的溶液在其顶部分层。由于每个步骤的体积很小(350 μl)，原生质体仅在10分钟后就聚集在顶部界面上。类似的三层梯度使用略高浓度的NycodenzⓇ为70%和50% (w/v)。
大麦胚乳的原生质体（Protoplasts of the barley endosperm）分离
将在40-50 g下获得的粗原生质体颗粒悬浮于2 ml 40% (w/v) NycodenzⓇ(50 mM CaCl2, 25 mM MES, pH 5.5)中，分别覆盖1 ml 26.6%、13.3%和6.6% NycodenzⓇ(通过原生质体培养基稀释40% Nycodenz溶液产生)。在40-50 g离心4min后，在梯度的顶部获得了两条原生质体条带。
苋属的原生质体（Protoplasts of Amaranthus sp）分离
用NycodenzⓇ-山梨醇梯度法分离苋菜子叶原生质体。梯度包含三层(1) 20.5%（w/v）NycodenzⓇ、0.25 M山梨醇、(2)8.2% NycodenzⓇ、0.4 M山梨醇和(3) 4.1% NycodenzⓇ、0.45 M山梨醇。在这种情况下，粗原生质体悬浮液在顶部分层，在200 g离心4分钟后，从最低界面回收原生质体。
苏格兰松芽愈伤组织的原生质体（Protoplasts of the Scotch pine shoot callus）分离
使用通过6% (w/v) NycodenzⓇ层浮选。
Nycodenz® 产品信息
理化特性
●分子量：821 g/mol
●密度：2.1 g/ml
●溶于水浓度：80% (w/v)，溶于水密度：1.426 g/ml
稳定性和储存
●固体形式的Nycodenz®在室温和避光条件下可稳定保存2年。
产品特点
●非离子型，对细胞无毒，代谢惰性
●可用于细胞、亚细胞细胞器和膜、大分子和病毒的分离
●形成真正的溶剂。因此，分离后很容易从细胞中除去培养基
●能抵抗细菌降解
●溶液可以进行高压灭菌
使用方法
1. 通过离心在原位形成的(自形成渐变)。
2. 将所需浓度的溶液分层放入适当的离心管和允许的解决方案扩散。使用Nycodenz®等渗溶液梯度可以在45分钟内简单地准备好。
3. 冷冻和解冻。
4. 梯度混合器。
应用
Nycodenz®可用于核酸、蛋白质、多糖和核蛋白的分离。此外，在等渗或轻度高渗条件下，大多数类型的亚细胞器都可以在Nycodenz®的梯度上成功分离。Nycodenz®渗透压低，无毒，是分离完整活细胞的理想介质。Nycodenz®的低粘度及其非离子特性已经证明了Nycodenz®在病毒和细菌的分离和纯化方面是有用的。
可分离：
哺乳动物和非哺乳动物的细胞
亚细胞的细胞器
非哺乳动物来源的细胞器
亚细胞的膜
蛋白质和蛋白质复合物
核糖核蛋白
病毒
Nycodenz®可以通过透析、超滤或凝胶过滤从样品中去除。细胞、亚细胞细胞器和其他颗粒物质可以通过离心从Nycodenz®中分离出来，而不会有被Nycodenz®污染的风险。
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