【Serumwerk】精子（Sperm）纯化
精子纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
精子（Sperm）纯化
溶液制备
A. NycodenzⓇ粉末
B. 稀释剂：6 mM氯化钾，10 mM Tricine（或HEPES）-氢氧化钠，pH 7.4
C. 任何缓冲盐水平衡盐溶液或培养基
为了制备100 ml 1.15 g/ml原液，将约50 ml溶液B置于150 ml烧杯中，置于设置为约的加热磁搅拌器上。50℃并以少量添加27.6 g NycodenzⓇ直至溶解。让溶液冷却到室温，然后用水配制多达100毫升。必要时进行过滤消毒。
试验方法
1. 计量出4.85 ml, 6.9 ml和9.0 ml的27.6% NycodenzⓇ原液，用补充的Ham 's F10培养基稀释到13.8 ml。这产生9.7%，13.8%和18% (w/v) NycodenzⓇ的溶液。
2. 从1.6 ml、1.6 ml、3.2 ml和1.6 ml的9.7%、13.8%、18%和27.6% (w/v) NycodenzⓇ溶液形成不连续梯度。
3. 用等量的补充Ham 's F10培养基稀释液化的精液，并将其铺在梯度上。
4. 以350 g离心12分钟。
5. 收集18% NycodenzⓇ层底部的活动精液。
方法注释
1．在这些方法中，可用碘克沙醇取代。使用所选稀释剂产生密度为1.15 g/ml的原液，将27.6 ml的OptiPrep™稀释到60 ml。
2．Sbracia等使用简化的两层梯度，分别来自9.7%和18% (w/v) NycodenzⓇ的2 ml。在上样前，精液在HTF+BSA培养基中稀释，梯度离心400 g 20分钟。在这种格式下，精液形成颗粒。
3．NycodenzⓇ的精子活力(24小时后)的长期保留率(在24小时后)与PercollⓇ相比显著提高:35%与26%，初始活力分别为60%与40%。NycodenzⓇ样本也显示出较高的总活动精子保留率。
4．在NycodenzⓇ试验中，精子活动指数(样本中速度和活力的倍数，精子与卵母细胞相互作用的效率的衡量指标)高出75%。
Nycodenz® 产品信息
理化特性
●分子量：821 g/mol
●密度：2.1 g/ml
●溶于水浓度：80% (w/v)，溶于水密度：1.426 g/ml
稳定性和储存
●固体形式的Nycodenz®在室温和避光条件下可稳定保存2年。
产品特点
●非离子型，对细胞无毒，代谢惰性
●可用于细胞、亚细胞细胞器和膜、大分子和病毒的分离
●形成真正的溶剂。因此，分离后很容易从细胞中除去培养基
●能抵抗细菌降解
●溶液可以进行高压灭菌
使用方法
1. 通过离心在原位形成的(自形成渐变)。
2. 将所需浓度的溶液分层放入适当的离心管和允许的解决方案扩散。使用Nycodenz®等渗溶液梯度可以在45分钟内简单地准备好。
3. 冷冻和解冻。
4. 梯度混合器。
应用
Nycodenz®可用于核酸、蛋白质、多糖和核蛋白的分离。此外，在等渗或轻度高渗条件下，大多数类型的亚细胞器都可以在Nycodenz®的梯度上成功分离。Nycodenz®渗透压低，无毒，是分离完整活细胞的理想介质。Nycodenz®的低粘度及其非离子特性已经证明了Nycodenz®在病毒和细菌的分离和纯化方面是有用的。
可分离：
哺乳动物和非哺乳动物的细胞
亚细胞的细胞器
非哺乳动物来源的细胞器
亚细胞的膜
蛋白质和蛋白质复合物
核糖核蛋白
病毒
Nycodenz®可以通过透析、超滤或凝胶过滤从样品中去除。细胞、亚细胞细胞器和其他颗粒物质可以通过离心从Nycodenz®中分离出来，而不会有被Nycodenz®污染的风险。
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