【Serumwerk】从植物和植物细胞中分离细胞器
从植物和植物细胞中分离细胞器不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
叶绿体（Chloroplasts）分离
Laganowsky等人用36% (w/v)的碘克沙醇缓冲垫从拟南芥的过滤匀浆中纯化和粒化叶绿体，含有0.27 M蔗糖，2 mM EDTA-Na₂，1 mM MgCl₂，0.2%牛血清白蛋白，50 mM hepps - naoh, pH 7.6，在1200 g下4°离心10分钟。碘克沙醇纯化的叶绿体和更传统的Percoll®纯化细胞器在电子传输特性方面没有差异。需要指出的是，如SDS-PAGE等附加程序需要去除残留的Percoll;然而，对于碘克沙醇，这只适用于电子显微镜。
过氧化物酶体/乙醛酸循环体（Peroxisomes/glyoxysomes）分离
有报告使用OptiPrep™从黄化大豆子叶分离过氧化物酶体使用初始Percoll®梯度，随后将部分纯化的细胞器分层到15.5-36% (w/v)碘克沙醇梯度0.3M蔗糖，1mM EDTA, 0.1%乙醇和5mM MOPS-HCl pH 7.2;下层垫层为50% (w/v)碘克沙醇，含25mM蔗糖，0.5mM EDTA, 0.05%乙醇，2.5mM MOPS-HCl pH 7.2。在10万g离心2.5小时后，过氧化物酶体非常明显地靠近垫子。是否可以省略Percoll®梯度尚不清楚。
线粒体（Mitochondria）
Hartman等人通过将拟南芥细胞匀浆于含0.25 M蔗糖，1 mM EDTA, HEPES-NaOH, pH 7.4的常规细胞器培养基中，分析了拟南芥培养物的线粒体。在2,200 g浓度下去除未破碎的细胞、细胞壁碎片和细胞核5 min后(上清液在相同条件下离心)，剩余的细胞器被浓缩到16% (w/v)的碘克沙醇垫上，浓度为100,000 g，作用2h。g-力是否可以减小需要实验验证。收集膜带;重新调整到16% (w/v)碘克沙醇，膜以自身产生的梯度(约为0.98 w/v)条带。将11 ml试管置于35万g的垂直转子中3小时。在斜坡的四分之三处。
扁桃体（Tonoplasts）分离
将来自Pteris vittata匀浆的微粒颗粒调整为15% (w/v)碘克沙醇;在8% (w/v)碘克沙醇溶液下分层，管中填充上层隔离介质。在ED (100000 g)离心45分钟后，液泡膜在0%和8%碘克沙醇界面条带。在一种改良的方法中，将来自8000 g上清液的颗粒悬浮于15% (w/v)碘克沙醇(悬浮培养基)中，覆盖悬浮培养基，并在100,000 g离心1小时。界面材料(15%碘克沙醇)覆盖于8%、4% (w/v)碘克沙醇和悬浮培养基。重复离心后，液泡膜囊泡在顶部界面处条带。
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