【Serumwerk】从原生动物和变形虫（Protozoa and amoebae）中分离细胞器（Cell crgan）
从原生动物和变形虫中分离细胞器不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
氢化基因组（Hydrogenomes）分离
变形鞭毛虫 阿米巴原虫（Flagellate metformans, amoebisp）分离
将覆盖15-40%范围的不连续碘二醇在100,000 g下离心过夜，分解氢化体组分。
毛滴虫属（Trichomonas）分离
从毛滴虫核后上清液中，通过17000 g离心20 min，制备粗制的阴道毛滴虫氢酶体(在0.25 M蔗糖，0.5 mM KCl, 10 mM Tris-HCl, pH 7.2和常见蛋白酶抑制剂中进行超声匀浆)。连续(18-36% w/v碘克沙醇)或在相同浓度范围内不连续(以2%步骤进行)。在50% (w/v)碘克沙醇中对样品进行底层分层并且在200,000 g下离心2 h。在约30% (w/v)碘克沙醇条带化的氢酶体。在Kay等人发表的一种替代方法中，粗组分被悬浮在0.25 M蔗糖，20 mM HEPES, 5 mM DTT中，含有6% (w/v)碘克沙醇和通常的蛋白酶抑制剂，并在12-24% (w/v)碘克沙醇梯度上分层，70,000 g离心2小时。氢酶体的条带位置由其特征的浅棕色确定。最近，将15,000 g颗粒在200,000 g下在不连续的12-30%碘克沙醇梯度中分馏12 h。
梨形鞭毛虫属（Giardia）分离
贾第鞭毛虫含有溶酶体样细胞器，与哺乳动物溶酶体一样，其密度相对较低。当100,000 g的核后上清(由贾第鞭毛虫的超声裂解物制备)在1.05-1.25 g/ml Nycodenz®梯度中分离时，离心后细胞器条带在约在1.07 g/ml。15万g 2.5小时Jedelský等使用不连续的OptiPrepTM梯度(15%，20%，25%，30%和50%)在12万g离心24小时来分离贾第鞭毛虫匀浆的研究表明，与哺乳动物线粒体相比，贾第鞭毛虫线粒体的蛋白质组减少。作者的结论是，这是由于环境中的低氧含量，这需要减少一系列的代谢过程。
草履虫（Paramecia）分离
在陷阱蛋白分布研究中，在46000g条件下，在10-30%（w/v）碘二醇梯度上分离18小时
弓形虫（Toxoplasma）分离
将宿主细胞分离以研究空泡的细胞器关联：将细胞的轻线粒体部分调整为20% (w/v)碘克沙醇，并在小体积近垂直的转子中通过180,000 g离心4 h形成自我生成的梯度。最近，从弓形虫速殖子中分离出的“植物样液泡”不连续梯度为15%、20%(含“微粒体部分”)、25%、30%、34%和38%碘克沙醇，并在50000 g离心1小时。液泡条带靠近梯度的顶部。
相关产品推荐
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
