【Serumwerk】树突状细胞（Dendritic cells）分离——低密度屏障浮选法
树突状细胞分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇瓶）
B. 悬浮液：Hank’s平衡盐溶液（不含Ca2+和Mg2+)
C. 稀释剂：0.88%（w/v）氯化钠，1 mM EDTA，0.5%（w/v）牛血清白蛋白（BSA），10 mM HEPES-NaOH，pH 7.4
D. 消化溶液：含5%胎牛血清（FCS）的RPMI（DMEM或IMDM），10 U/ml胶原酶
试验方法
组织分离
1. 通过解离所选组织制备单细胞悬液方案可能因实验室而异。
2. 将切碎的组织在37℃溶液D中消化两次并保持30 min。
3. 通过不锈钢筛进行消化。
4. 通过离心收集细胞，并根据需要在平衡盐培养基中洗涤细胞。
梯度分离
1. 从溶液A和C (1:4.2 v/v)配制11.5% (w/v)碘克沙醇溶液(ρ = 1.065 g/ml)。
2. 将洗涤过的细胞颗粒悬浮于溶液B中，与OptiPrep (3:1 v/v)温和但彻底混合，得到15% (w/v)碘克沙醇溶液(ρ = 1.085 g/ml)。将4 ml该悬浮液与5 ml 11.5%碘克沙醇溶液和3 ml溶液B覆盖。
3. 在室温(约20℃)下以600 g离心15 min。
4. 允许转子在没有刹车的情况下减速，并从11.5%碘克沙醇层的顶部获得直流。
方法注释
1．消化培养基的成分只作为基本配方，其他成分如抗生素；可根据操作人员的要求包括谷氨酰胺。
2．术者应使用对选定组织有效的任何消化方案。然而，重要的是，消化后对细胞的处理应尽可能轻柔，以避免对细胞的潜在损害。有时在最终的细胞悬浮培养基中包括DNase I和/或EDTA以减少任何细胞聚集。
3．这种培养基不应含有Ca2+或Mg2+，但可允许含有FCS。
4．一些出版物报告使用高于1.065 g/ml(最高1.071 g/ml)的上层密度和不同于溶液C的组合物介质来稀释OptiPrep™。
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