【Serumwerk】细胞和组织中纯化：大鼠肝脏均质化（Rat liver was homogenized）
大鼠肝脏均质化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. Potter-Elvehjem均质器(30-40 ml)，间隙约0.08 mm
B. 壁挂式，大扭矩，可控硅控制的电动机
C. 细布或尼龙网(75µm孔径)
D. 均质培养基(HM): 0.25 M蔗糖，1 mM EDTA, 20 mM HEPES-NaOH, pH 7.4;核用5 mM MgCl2和25 mM KCl取代EDTA。
试验方法
把所有的设备都放在冰上。
1．必要时灌注肝脏，然后迅速切除组织到冰冷的HM中。
2．将肝脏转移到50毫升的烧杯中(放在冰上)，用剪刀切碎，组织块不超过30 mm3。
3．对于一个肝脏(10-12 g)，将粗糜悬浮于40 ml溶液D中；搅拌，待肉末沉淀后再倒入液体。重复这个过程;最后悬浮于40 ml溶液D中并将其中一半转移至匀浆器的玻璃容器中。
4．将冰冷的舂杵固定在电动机的卡盘中，以500-800转/分的速度旋转，用舂杵上下敲击5-6下使肝脏均质化。如果组织在血管底部变得致密;收回杵，让液体中的涡旋作用使组织重新悬浮。
5．用另一半组织悬浮液重复上述步骤。
6．如有需要，可通过尼龙纱布或三层薄纱过滤，以去除未被破坏的细胞和结缔组织。不要通过挤压迫使悬浮液通过过滤器。
方法注释
1．该方法可作为一种通用的均质化方法，用于从大多数软组织或经酶消化的硬组织中分离出大多数细胞器和膜颗粒。
2．为了分离质膜片，在进一步处理之前，最好用一个宽松的Dounce匀浆机(间隙为0.1-0.3 mm)代替Potter-Elvehjem匀浆机。
3．在匀浆中加入蛋白酶抑制剂的混合物HM: 1 mM苯基甲基磺酰氟(PMSF)和2µg/ml的抗疼痛剂、白细胞肽素和抑肽酶，通常有利于防止蛋白水解。
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