【Serumwerk】小鼠肿瘤病毒（Mouse tumor virus）纯化
小鼠肿瘤病毒纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
自生成梯度
A. OptiPrep™
B. 悬浮液：0.15 M NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl, pH 7.2
C. 梯度溶液:用溶液B稀释OptiPrepTM，得到6和18% (w/v)碘克沙醇两种溶液
其他梯度系统
1．将感染细胞上清液1500 g离心20 min，澄清后通过0.22 μm滤器。
2．通过将病毒悬浮液在100,000 g下以密度屏障造粒2 h浓缩病毒悬浮液并将其重悬于小体积溶液B中。
3．使用双腔梯度标记器或Gradient Master™从13-14 ml管中两种碘克沙醇溶液各约6 ml制备连续梯度。
4．将粗提病毒悬浮液(1.0-1.5 ml)分层置于梯度上方并以187,000 gav在4℃下离心1 h 20 min。
5．先从低密度端向上移位收集梯度，约0.8-1.0 ml。从梯度底部1- 2ml处急剧分离病毒条带。
方法注释
1．如果没有梯度制备装置，则配制6.0%、9.0%、12.0、15.0%和18.0% (w/v)碘克沙醇溶液。
2．Fujisawa等人将病毒通过20%的蔗糖垫制成颗粒;为了维持病毒的等渗环境，可以用15% (w/v)碘克沙醇替代20%的蔗糖。理想的浓缩病毒的方法是沉淀在碘克沙醇的致密垫层上，而不是造粒。然而，在这种情况下，碘克沙醇在病毒悬液中的浓度需要为5% (w/v)才能加载到梯度上时，这种方法可能不太方便。在回收病毒带时，必须尽可能少地抽吸缓冲液。
3． 或者从等体积的6.0%、9.0%、12.0、15.0%和18.0% (w/v)碘克沙醇形成一个不连续的梯度，并允许通过扩散形成一个连续的梯度(约在室温下放置5小时，或在4°C放置过夜)。
4．Dettenhoffer和Yu引入了HIV-1的沉降速度策略，他们以1.2%的碘克沙醇浓度区间将溶液分层，制备了“基本上连续”的梯度。要从众多的小体积步骤中形成不连续的梯度需要大量的实践，无论使用的是移液管还是注射器，也无论使用的是叠层还是底层技术。
5．如果要纯化较大体积的粗病毒，则必须使用较大体积梯度。由于这是一种沉降-速度分离，粗制病毒悬液的体积不应超过梯度体积的10-15%。
6．如果要在更高的温度下进行分离，则可能需要减少离心时间以考虑梯度的降低粘度。
7．通过导管穿刺收集梯度可能是一种有用的替代方法。
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