【Serumwerk】埃博拉病毒科（Ebola virus）纯化

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Serumwerk Bernburg AG

Serumwerk Bernburg AG 1893 OptiPrep™

小白求助前辈指路

埃博拉病毒科纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

溶液制备

A. OptiPrep™

B. 裂解培养基：0.05% 吐温20，磷酸盐缓冲盐水

试验方法

1．将细胞悬浮于溶液B中并通过冻融将其裂解(三个重复)。

2．通过1500 g离心10 min澄清病毒悬液。

3．将澄清的裂解产物与等体积的OptiPrep™混合，产生30% (w/v)的最终碘克沙醇浓度。

4．将悬挂转移到适合垂直或接近垂直转子的管道上。在Beckman VTi50离心机中，160,000 gav (45,000 rpm)离心6小时。在Beckman VTi65.1垂直转子或NVT65近垂直转子中，要么使用相同的RCF和离心时间，要么使用两倍的RCF和一半的离心时间。

5．在离心结束使用控制减速程序或关闭制动低于2000转。

6. 在半月板上进行等体积(20 ~ 25次，不考虑梯度体积)的抽吸，去除梯度。衣壳条带位于约1.17 g/ml

方法注释

在方案的第3步，将裂解产物与等体积的OptiPrep混合，这意味着缓冲液和吐温20的浓度将降低50%。如果认为这是不可接受的，那么首先通过将5.4体积的OptiPrep™与0.6体积的含0.5% 吐温20的10xPBS混合，产生54% (w/v)碘克沙醇的工作溶液。

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发布日期：2024-02-07 09:25:27
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