【Serumwerk】德尔塔逆转录病毒Deltaretrovirus—人T细胞淋巴病毒（HTLV-1）和人内源性逆转录病毒纯化
德尔塔逆转录病毒纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
自生成梯度
溶液制备
A. OptiPrep™
B. 稀释剂:0.85% (w/v) NaCl, 60 mM Hepes-NaOH, pH 7.4
C. 50%碘克沙醇(ρ = 1.272 g/ml)工作液:5体积溶液A与1体积溶液B混合。
D. HEPES缓冲盐水:0.85% NaCl (w/v)， 10 mM HEPES-NaOH, pH 7.4，1 - 3。
试验方法
1．通过1000 g离心10 min澄清病毒悬液。
2．将已知体积的上清液转移到适合摆动桶转子的管道中，并在底部放置小体积(2-4 ml)溶液C。
3．以160,000 gav离心1小时，使病毒在工作溶液界面急剧条带。
4．除去所有上清液，只保留相当于垫子体积1.5倍的量。
5．混合管的残余内容物。此将在20% (w/v)碘克沙醇中产生浓缩病毒悬液。
6．将悬液转移到适合垂直、近垂直或低角度固定角度转子的管道中，使病毒在碘克沙醇的自生成梯度中条带。
7．任何未注满的管应加满并与20% (w/v)碘克沙醇混合(混合溶液C和D的体积比为1:15)。
8．以350,000 gav离心3.5小时，在离心结束时使用受控减速程序或在2000 rpm以下关闭制动器。
9．要么用注射器和金属套管获取病毒带，要么用导管穿刺卸载整个梯度，或其他合适的方法。在描述的离心条件下，逆转录病毒将在靠近试管底部的地方条带。
方法注释
1．该方法可以扩大规模，以使用较大的垂直转子，如贝克曼VTi50，但较长的沉降路径和较低的最大RCF意味着需要更长的离心时间。与埃博拉病毒的合作表明，45000转6小时是令人满意的。
2．实际体积将取决于病毒液的总体积和所用管的体积。例如:每管约15毫升上清液，使用1-2毫升缓冲液；35 ml使用2-4 ml。
3．由于接近梯度底部的病毒带和污染膜较轻，从底部收集是首选的方法。
4．大约3.5小时后，产生的梯度或多或少呈线性，但在密度最大的区域确实逐渐变得陡峭。它能有效地使病毒在接近管底的地方急剧条带，而任何膜污染条带的密度较低。如果认为将病毒带离管底更远是有利的，则增加起始碘克沙醇浓度至25% (w/v)。
5．Møller-Larsen和Christensen观察到，从碘克沙醇梯度分离出的碘克沙醇逆转录病毒颗粒比从其他梯度介质分离出的碘克沙醇逆转录病毒颗粒的损伤小得多。这些作者还指出，该方法可用于纯化HTLV-1。该方法随后被用于研究逆转录病毒与多发性硬化的关系。我们也从人黑色素瘤细胞的上清液中分离出逆转录病毒颗粒(HERV -H)。通过逆转录酶测定法测定的病毒颗粒具有约1.10 g/ml的低密度。
其他梯度系统
Hirschl等表明，黑色素瘤细胞产生了与人类内源性逆转录病毒同源的病毒颗粒。在他们简短的交流中，没有详细描述连续的碘克沙醇梯度，该梯度在287,000 g离心18小时。而内源性逆转录病毒在1.06 ~ 1.11 g/ml的密度范围内条带清晰。10.5-20% (w/v)碘克沙醇。Contreras-Galindo等分析了来自淋巴瘤和乳腺癌患者的人类内源性逆转录病毒K。HERV-K首先通过20%（w/v）碘二醇缓冲液在45000g下造粒2小时，然后梯度离心。在随后发表的一篇论文中，研究了来自感染HIV-1患者的内源性逆转录病毒颗粒。作者使用相同的20%碘克沙醇缓冲垫浓缩病毒，然后将病毒悬液装入10-50% (w/v)碘克沙醇梯度上，以350,000 g离心6 h。颗粒密度约为1.16 g/ml。
使用与广泛用于HIV的速度梯度相似的方法分离出HTLV-1。将顶部负载的6-20% (w/v)碘克沙醇在80,000 g下离心3h。最近，Caoey 等首先通过8% (w/v)的碘克沙醇垫将HTLV-1颗粒化，然后通过10-50%的碘克沙醇梯度纯化病毒——没有提供其他细节。
相关产品推荐
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
