【Serumwerk】呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus）纯化
呼吸道合胞病毒纯化不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™
B. 150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, pH 7.5
C. 存于溶液B中的50% (w/v) PEG6000
D. 1 M MgSO4, 0.25 M蔗糖，100 mM Tris-HCl, pH 7.5
E. 100 mM MgSO4, 0.25 M蔗糖，10 mM Tris-HCl, pH 7.5
F. 100mm MgSO4, 150mm NaCl, 50mm Tris-HCl, pH 7.5
试验方法
1．将5.2体积的OptiPrep™与0.6体积的溶液D和0.2体积的水混合，制备52% (w/v)的碘克沙醇溶液。用溶液E稀释部分52%的碘克沙醇溶液，制备36%和20% (w/v)碘克沙醇溶液。
2．3000 g离心20 min澄清含病毒培养液。
3．借由将溶液C添加至3000 g上清液(分别为1体积+ 4体积)中浓缩病毒并于4℃下轻轻搅拌90 min。
4．以3250 g将病毒离心20 min。
5．去除上清液并重新离心颗粒以去除剩余液体;将颗粒悬浮于1.0 ml F溶液中。
6．用三种碘克沙醇溶液(52%，36%和20%)各配制约4.0 ml的不连续梯度溶液，用于摆动式转子。
7．把病毒层放在梯度上，15万g离心90分钟。使用一个缓慢减速程序或允许转子从3000转，没有刹车减速。
8．在离心过程中，使用双腔梯度标记器或Gradient Master™从等体积(约5.5 ml)的20%和52%碘克沙醇中产生连续梯度。
9．从间断梯度的20-30%界面恢复病毒带，用2体积的F溶液稀释。
10．将病毒悬液层置于准备好的连续梯度上，以150,000 g离心18小时。使用缓慢减速程序或允许转子从3000转/分钟开始减速，而不使用刹车。
11．通过从半月板抽吸，用密集的介质向上移位或导管穿刺的方式收集梯度，并分析分数。
方法注释
1．将蔗糖溶液用0.1%焦碳酸二乙基(DEPC)在37℃处理24小时以使RNA酶失活，然后加热到60℃ 3天以去除DEPC。在此处理后检查pH值和溶液体积，如果需要重新调整。
2．3种碘克沙醇溶液必须配制足量，至少4个梯度；两个不连续的梯度和两个连续的梯度。如果没有用于制备连续梯度的设备(步骤8)，则按照步骤6中的描述制备不连续梯度，并使其在4℃下扩散过夜。
3．此病毒收获将被重新加载到步骤10的第二个梯度上，因此其密度必须足够低，以允许此操作。当回收条带样品时，尽可能少的36%碘克沙醇层。
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